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抗疲劳药物及天然产物的研究进展 疲劳是身体复杂生理生化变化的过程，是指大脑和体力在一定阶段内不可避免地出现的正常生理现象。它既标志着机体原有工作能力的暂时下降,又可能是机体发展到疾病状态的先兆。1982年第五届国际运动生化会议统一了疲劳的概念:机体生理过程不能持续其机能在一特定水平或各器官不能维持预定的运动强度。从中枢神经系统到骨骼肌细胞再到细胞内的物质代谢过程,中间任何一个环节或者过程综合变化,都可造成疲劳。据WHO调查,全球有35%以上的人处于疲劳状态,中年男性人群疲劳状态达60%。疲劳的出现,可引起运动能力降低、工作效率降低、差错事故增多、战斗力减退。疲劳发生后如果得不到及时恢复,逐渐积累,还会导致“过劳”,出现“慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome,CFS)”、“过度训练综合症”等,使机体发生内分泌紊乱、免疫力下降,甚至出现器质性疾病,威胁人类健康。本文就近年来抗疲劳研究方法进展及天然产物抗疲劳作用研究进行综述。 1 负荷变化对代谢及抗疲劳的影响 疲劳的表现主要是运动时体内能量降低和肌肉力量的下降,测定机体持续运动到力竭的时间可以反映机体的耐力;而负荷运动引起机体的生化指标变化可反映疲劳的程度。因此,可以用这些生化指标来研究疲劳的发生及其发展变化过程。由于运动负荷强弱并不都与机体生化指标改变一致,因此并非所有衡量运动变化的生化指标都适合评价疲劳或抗疲劳的作用。此外,作为常用的评价生化指标项目还应具有检测方法灵敏、操作简便、结果客观的特点。 1.1 一般疲劳试验 1.1.1 实验小鼠的材料 在末次给予受试物60 min后,将尾根部负荷2%~5%体重铅丝的小鼠置于游泳箱中。游泳箱水深30 cm,水温25.0℃±0.5℃,记录自游泳开始至头部全部沉入水中10 s不能浮出水面的时间,作为小鼠力竭游泳时间。 1.1.2 玻璃棒长的确定 在小鼠末次给予受试物30 min后,将经预实验筛选合格的爬杆小鼠放在长25 cm,直径1 cm光滑的有机玻璃棒上,使肌肉处于静力紧张状态,第三次落水时终止实验,累计三次小鼠从玻璃棒跌落下来的时间。 1.1.3 s水迷实验 20世纪80年代初,Morris发明了水迷宫(Morris water maze,MWM)实验来测量空间学习和记忆能力,用于评估啮齿动物由于衰老、药物和外伤等因素所造成对运动和精神系统的影响。该装置使用简便易学,目前已被认为是此类研究的经典方法。Morris水迷宫实验主要包括两个实验,隐蔽平台实验和空间探索实验。实验在隔音安静的房间内进行,水温控制在22.5℃±0.5℃,前1 d将小鼠放入水中自由游泳2 min以熟悉环境。水是啮齿动物厌恶的环境,因此,当其达到平台后,会迅速记忆周边参照物。隐蔽平台实验时,从东、西、南、北四个象限随机选择作为入水点,按顺时针方向将小鼠面向池壁放入水中,记录大鼠从入水至爬上平台的时间(即逃避潜伏期)、游泳路程、平均游泳速度及搜索模式。若120s内未找到平台,则由实验者用手引导其至平台,并停留相同时间逃避潜伏期记为120 s。实验7 d后,进行空间探索实验,将平台移除。随机选择一入水点,将小鼠置于水中游泳60 s,期间测量跨平台次数、目标象限游泳时间、目标象限游泳时间与总时间之比、平均游泳速度、游泳路程及搜索模式。每次完成后用毛巾或烘干器使小鼠体温维持正常,避免由低体温所致的应激。 1.1.4 小鼠单次给药及小鼠单次悬挂 在实验小鼠尾端1 cm的部位,将其粘贴在一水平木板上,木板离地10 cm以上,小鼠呈倒挂状。悬尾两侧用板隔开小鼠视线,小鼠为克服不正常体位而挣扎活动,但在活动一段时间后,出现间隔性“不动”显示“疲劳、失望”状态,计算6~8 min内“不动时间”,并同时观察大鼠挣扎幅度及抑郁状态。 1.1.5 第三级负荷 选用体重220~260 g大鼠,采用根据Bedford大鼠体重摄氧量,建立的回归方程渐增负荷运动模型。按以下程度运动至力竭。第一级负荷:坡度0°,速度8.2 m min,时间15 min;第二级负荷:坡度0°,速度15.0 m min,时间15min;第三级负荷:坡度10°,速度19.3 m min,相当于76%最大摄氧量,运动至力竭。运动时使用毛刷刺激其尾部,使其保持在跑道前1 3处,以保证运动强度。力竭标准,第三级负荷运动中,动物未能坚持本级负荷跑速,先后滞跑道后1 3处达3次以上,刺激驱赶无效。行为特征为呼吸急深及幅度大、腹卧位、垂头、刺激后无反应。 1.2 抗疲劳综合指标的常用抗疲劳生化指标 1.2.1 影响肌肉生化指标的药物因素 乳酸(lactic acid,LA)是碳水化合物无氧糖酵解的最终产物,在乳酸脱氢酶的作用下由丙酮酸还原而生成的酸性代谢产物,而碳水化合物是短时间高强度运动最主要的能量来