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光照对海水中氮磷营养盐吸收的影响 0 藻环境因素对废水中的氮、磷的去除效果 微藻是海洋生态系统的主要初级生产者。它具有生长速度快、适应性强、容易栽培等特点。微藻生长期间,各种形式的无机氮和磷酸盐均可被其吸收。早在1957年Oswald等就提出利用藻类去除污水中的氮、磷营养物质,近年来的研究进一步确认了藻类对废水中氮磷去除的作用和效果均十分显著。由于藻类的生长和营养物的吸收不仅受到可用性营养物和藻种的影响,而且还依靠诸多环境因素,如pH、光照、温度等,所以目前研究的重点主要是各种环境因素对藻的生长和对营养物质去除的影响。 笔者于2011年4月取灌河口现场海水于实验室3种光照度下进行培养,研究了光照度对海洋微藻吸收磷酸盐和硝酸盐以及去除率的影响,以此为微藻去除废水中氮磷的产业化研究提供实验依据和参考。 1 材料和方法 1.1 实验材料 筛绢、125 mL聚乙烯塑料瓶、0.45 μm醋酸纤维滤模、10 mL离心管。 1.2 主试剂和设备 1.2.1 试剂和溶液 质量分数4%的盐酸钼酸铵溶液、质量分数2%的抗坏血酸溶液、质量分数0.5%的氯化亚锡溶液、质量分数0.4%的对氨基苯酸铵溶液、质量分数0.2%的盐酸萘乙二胺溶液、体积分数90%的丙酮溶液。 1.2.2 仪器 1 L三角烧瓶、过滤器、751型分光光度计、光照培养箱、光照度计。 1.3 光照、温度对微藻的影响 取灌河口(119°52.797′E,34°33.627′N)现场表层海水,经50 μm筛绢过滤以去除大型浮游动物和一些悬浮颗粒物,然后于实验室光照培养箱培养,培养容器为3只1 L三角烧瓶,分别在光照度为6 000 lx(8只20 W日光灯),3 000 lx(4只20 W日光灯)以及黑暗无光照下培养,温度为(25±1)℃,培养过程中每日振摇数次,保证微藻正常生长。 1.4 醋酸纤维滤模的制备 分别在0,12,24,36,48,60 h取100 mL培养水样,经0.45 μm孔径的醋酸纤维滤模过滤,滤液储存于125 mL聚乙烯塑料瓶中,用于测定硝态氮和无机磷,滤膜储存于10 mL离心管,用于萃取测定叶绿素a。硝态氮的测定采用锌-镉还原法,无机磷的测定采用抗坏血酸-氯化亚锡显色法,叶绿素a测定采用比色法。 1.4.1 深红色偶氮染料检测 先用重氮-偶氮法测定水样中的亚硝酸盐,即在酸性条件下水样中的亚硝酸盐与对氨基苯酸铵发生反应,反应产物与盐酸萘乙二胺作用,生成深红色偶氮染料,于543 nm波长处进行光度测定;然后用锌-镉还原法将水样中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,按照重氮-偶氮法测定总亚硝酸盐的吸光值,扣除水样中原有亚硝酸盐吸光值后,计算硝酸盐的浓度。 1.4.2 磷酸测定 磷酸盐在酸性条件下与钼酸铵发生作用生成黄色钼酸铵,然后被抗坏血酸-氯化亚锡还原成钼蓝化合物,于650 nm波长处进行光度测定。 1.4.3 吸收剂量的测定 往10 mL离心管中加入体积分数90%丙酮,于4 ℃阴暗处萃取24 h,提取液在1 400 r/min的转速下离心10 min,取上清液于630,647,664,752 nm波长下分别测定吸收度值,其计算公式为 ρ(叶绿素a)=11.85E664-1.54E647-0.08E630。 式中,ρ(叶绿素a)单位为μg/L。E为经750 nm波长校正后的吸光值,即E值应扣除E750的数值。 2 结果与讨论 2.1 磷酸盐的去除 如图1和图2所示,在6 000 lx光照度下磷酸盐吸收效果较显著于3 000 lx光照度,磷酸盐在6 000 lx光照度下在12,24,36,48,60 h的去除率分别为3 000 lx光照度下的3.53,3.03,1.21,1.23,1.13倍;在黑暗无光照下,培养期间磷酸盐浓度是保持增长的,这可能是黑暗下微藻无法生长,藻类细胞死亡从而释放磷酸盐的缘故。 2.2 x光照度对h的去除效果 如图3和图4所示,在6 000 lx光照度下硝酸盐吸收效果要明显显著于3 000 lx光照度,硝酸盐在6 000 lx光照度下在12,24,36,48,60 h的去除率分别为3 000 lx光照度下的5.83,4.44,3.13,6.11,2.83倍;在黑暗无光照下,培养期间硝酸盐浓度虽然不像磷酸盐那样是释放的,但吸收也不是很明显,在培养末期其浓度为18.83 μmol/L,而在6 000 lx和3 000 lx光照度下其浓度则分别为0.26和13.71 μmol/L。 2.3 x-射线光照下叶绿素a含量的变化 与氮磷营养盐吸收变化紧密相关,培养期间藻类叶绿素a质量浓度也出现相对应的变化(图5)。培养前叶绿素a质量浓度初始值为1.60 μg/L,在6 000 lx光照度下,叶绿素a质量浓度呈现快速增长趋势,在48 h时可达到初始值的36.79倍,60 h