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中药对便秘型肠易激综合征大鼠5-h、p物质、血管活性肽的影响

便秘性肠激综合征（ibs-c）是肠激综合征的亚型。这是指伴有腹泻、腹胀、排便习惯和异常大便状态的综合征，包括不能解释的持续或间歇性发作。目前其病因与发病机制尚不十分清楚,近年研究认为,IBS-C的发生可能与因情绪异常或应激造成的肠功能紊乱现象与体液因子中的胃肠激素失调有关,其中5-HT、SP、VIP等可能参与IBS-C整个病理生理过程,相互作用,相互影响。近年来,运用行气润肠汤对IBS-C的临床治疗取得了较大的进展,在改善症状上疗效显著。本研究旨在通过IBS-C模型大鼠的构建及相关指标的观测,进一步探讨行气润肠汤治疗IBS-C的疗效及作用机制。

1材料表面

1.1动物大学致江苏省东北部scxk-产品研究

SD大鼠32只,雄性,体质量(100±10)g。由上海斯莱克实验动物有限公司提供,合格证号:SCXK-(沪)2008-0016,饲养于江苏省中医院实验室。实验时室温控制在(22±2)℃,湿度控制在55%~65%,光照适度,通风洁净良好。饲养3d后,用于实验。

1.2药物和制备

1.2.1中药溶液的制备

方药组成:枳实10g,槟榔10g,乌药10g,白芍15g,生地黄15g,玄参10g,麦冬15g,杏仁10g,火麻仁20g,全瓜蒌20g,羌活10g,肉苁蓉10g,决明子30g。用蒸馏水浓煎而成含生药0.46g·mL-1的中药溶液。所需中药均购自江苏省中医院中药房,并由江苏省中医院煎药室煎成汤剂。

1.2.2福松溶液

福松(聚乙二醇散剂)(10g/包,博福-益普生工业公司,批号:D31778)溶解于100mL蒸馏水中配成0.1g/mL的福松溶液。所需西药购自江苏省中医院西药房。

1.3试剂和设备

1.3.1bpe326

5-HT试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号:BPE30326;SP试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号:BPE30328;VIP试剂盒:南京建成生物工程研究所,批号:BPE31682。

1.3.2球囊扩张导管

小儿8F导尿管,导管直径2mm,球囊最大容量3mL,最大直径2cm,用作直肠内球囊扩张导管,德国Braun公司制作;自制一20cm×8cm×8cm透明塑料盒作为鼠固定器;FA1004型电子分析天平:上海精科天平厂;LDZ5-2型离心机:北京京立离心机有限公司;SUNRISE酶标仪:瑞士TECAN公司。

2大鼠的造模及造模后检测

2.1造模方法、分组及给药将32只SD大鼠随机分为:正常组、模型组、行气润肠汤组、福松组4组。除正常组外,其余各组大鼠采用AL-Chaer等提出的结直肠球囊扩张刺激+限水法制备模型:SD大鼠在清醒的状态下,使用Braun8F导尿管自制的球囊,蘸少许石蜡油,自肛门轻柔插入,深度约4~5cm,大致达到大鼠的降结肠部位。每次气囊充气,维持肠道压力7.98kPa(60mmHg)(1mmHg=0.133kPa),保留1min,然后撤气。每次刺激之前,检查球囊的密闭性。给予扩张刺激前,可预先刺激大鼠肛门部,使其排尽大便,以减少粪团对扩张程度的影响。每日操作1次,共持续刺激15d。15d后,大鼠禁水不禁食,每天喂食饲料,不喂水(包括一切含水的蔬菜等),连续3d。

造模成功后第2天起,行气润肠汤组、福松组分别给予中药溶液、福松溶液2mL灌胃,正常组、模型组以生理盐水等容量灌胃。每组均连续灌胃14d。灌胃期间各组大鼠总饮水量均控制在200mL/d。

2.2造模方法的检验造模结束后,用腹部撤离反射(AWR)行为进行评分:将大鼠放入鼠固定器内,使大鼠只能前后运动,不能转身。将自制球囊外涂石蜡油润滑后,经肛门插入,气囊末端距肛门1cm,用4号手术缝线将导管与鼠尾根部固定,距鼠尾根部约2cm处用同样的方法固定。约20min后大鼠适应环境,情绪稳定。向球囊注入生理盐水(26℃~28℃),以0.3mL为起始量,以0.1mL递增,每个容量持续20s,由一名独立的观察者进行AWR评分,当出现AWR评分为4分时,完成一次测试,每次测试间隔30min,每只大鼠进行3次AWR评分,取平均分。记录AWR评分为1分、2分、3分、4分的容量阈值。评分标准为,给予刺激时,0分:大鼠情绪基本稳定,无行为学反应;1分:大鼠情绪不稳定,扭动头部;2分:大鼠腹背部肌肉轻微收缩,但腹部未抬离地面;3分:大鼠腹背部肌肉较强收缩,腹部抬离地面;4分:大鼠腹部肌肉强烈收缩,背部成弓形并把腹部、骨盆及会阴部抬离地面。AWR评分1分作为是大鼠的感觉容量阈值,2分作为痛觉敏感容量阈值,4分作为痛觉最大耐受容量阈值。

2.3观察指标及检测方法①各组大鼠于造模前、造模后及治