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中文摘要

褪黑素通过内质网应激介导细胞死亡抑制舌鳞癌生长

目的：

舌鳞状细胞癌（Tonguesquamouscellcarcinoma,TSCC）是极具侵袭性的口

腔鳞状细胞癌之一。TSCC易发生淋巴结转移，容易对化疗药物产生耐药性，预

后较差。因此，有必要制定有效的治疗策略来提高患者的生存率。褪黑素

（Melatonin,MT）是一种天然的吲哚类化合物，已被证明在各种癌症中具有抑制

肿瘤进展的作用。本研究的目的是研究MT对TSCC的作用和机制。

方法：

1.CCK-8法分析MT对舌鳞癌细胞的作用；Westernblot法分析CyclinB1

和p21的表达是否发生改变；定量PCR(qPCR)法分析p21是否在mRNA水平发

生改变。

2.用MT处理舌鳞癌细胞24h后，采用Transwell实验和伤口愈合实验分

析MT对细胞迁移能力的影响；Westernblot法检测Zeb1、Wnt5A/B、β-catenin、

c-myc、p-c-myc和E-cadherin蛋白的表达水平，在蛋白水平分析MT对舌鳞癌细

胞的影响。

3.使用MT处理舌鳞癌细胞24h后，采用Annexin-FITC/PI染色和流式细

胞术分析细胞凋亡水平；定量PCR(qPCR)法检测HRK、TNFRSF10A和

TNFRSF10B的mRNA水平；Westernblot法检测BAX、Bcl-2蛋白的表达水平，

分析MT对舌鳞癌细胞凋亡的影响。

4.使用雷帕霉素处理舌鳞癌细胞，Westernblot分析LC3、Beclin1、BAP31、

Bip蛋白的表达水平，分析雷帕霉素对舌鳞癌细胞的影响。

5.使用MT处理舌鳞癌细胞24h，定量PCR(qPCR)法检测LC3的mRNA

水平；Westernblot法检测LC3、P62、Beclin1蛋白的表达水平，分析MT对舌

鳞癌细胞自噬的影响。

6.使用MT处理舌鳞癌细胞24h，定量PCR(qPCR)法检测ATF4、ATF6、

BIP、CHOP的mRNA水平；Westernblot法检测BAP31、BIP、CHOP和IRE1α

I

蛋白的表达水平，分析MT是否诱导舌鳞癌细胞发生内质网应激。

7.使用生物信息学技术分析与细胞增殖、转移、凋亡、自噬和耐药性相关

的LncRNA在头颈部肿瘤中的表达情况，包括LncRNAMALAT1、LncRNAH19、

LncRNATUG1、LncRNAPTTG3P、LncRNADICER1-AS1和LncRNAGAS5。使

用MT处理舌鳞癌细胞24h，定量PCR(qPCR)法检测这些LncRNAs的表达水

平。

8.将正常CRL-1623细胞系注射至裸鼠腋窝的皮下，构建裸鼠异位移植瘤

模型，腹腔注射PBS和MT，在体内分析MT对舌鳞癌的作用。

结果:

在本研究中，我们发现MT可以抑制TSCC细胞的增殖。Westernblot的结

果显示，MT可以抑制CyclinB1蛋白并促进p21蛋白的表达。同时，MT可以

降低Wnt5A/B、Zeb1和β-catenin的表达，增加E-cadherin蛋白的表达，从而抑

制TSCC细胞的迁移能力。此外，我们的结果表明，MT可以增加LC3、Beclin1

和Bax蛋白的表达，降低p62蛋白的表达。这提示MT可以诱导TSCC细胞发

生自噬和凋亡。为进一步探索MT的作用，我们筛选了几种与细胞增殖、转移、

凋亡、自噬和耐药性相关的LncRNAs，并利用定量PCR(qPCR)分析了经MT处

理后TSCC细胞中这些LncRNAs的表达水平。我们的结果表明LncRNAMALAT1

和H19的表达下降，LncRNADICER1-AS1和GAS5的表达上升。此外，在体外

试验中，我们发现MT可以抑制接种CRL-1623的裸鼠的肿瘤生长。

结论:

这些结果表明，MT可