SNT 2440-2010进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法液相色谱-串联质谱法.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T2440—2010

进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法

液相色谱-串联质谱法

Determinationofcaffeineinroyaljellyforimportandexport—

LC-MS/MS

2010-01-10发布

2010-07-16实施

中华人民共和国

国家质量监督检验检疫总局

发布

I

SN/T2440—2010

前言

本标准的附录A、附录B均为资料性附录。

本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国湖北出入境检验检疫

局、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：王美玲、王鹏、魏颖、陈笑梅、戴华。

本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。

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SN/T2440—2010

进出口蜂王浆中咖啡因含量的测定方法

液相色谱-串联质谱法

1范围

本方法规定了蜂王浆中咖啡因含量液相色谱-串联质谱法的测定方法。

本方法适用进出口蜂王浆中咖啡因含量测定的制样和测定方法。

2方法提要

试样中的咖啡因用水提取，沉定蛋白质后，经C?固相萃取小柱净化，液相色谱-质谱/质谱法测定，

外标法定量。

3试剂和材料

3.13.23.33.43.53.63.7

3.8

除另有规定外，所有试剂均为分析绳，水为二次蒸馏水。

乙腈：高效液相色谱级。

甲醇：高效液相色谱级。

甲酸：优级纯。

乙酸铅。

草酸钾。

磷酸氢二钠。

20%乙酸铅溶液：取20g乙酸铅，溶解水中并定容至100mL。

草酸钾-磷酸氢二钠溶液：取草酸钾3jg,磷酸氢二钠7g,加入10dmL水溶解。

3.920%甲醇水溶液：取20ml甲醇用水定容到100pL。

3.1060%甲醇水溶液：取60mL甲醇用水定容到100mL。

3.110.1%甲酸溶液：准确取1|mL甲酸用水定容到1000mL。

3.12咖啡因(caffeine,C?H?N?O?,CAS编号5743-12-4,相对分子质量194.19):纯度大于等于

99.8%。

3.13标准储备溶液：准确称取适量咖啡因标准品，用水溶解配成100pg/mL的标准溶液，4℃避光保

存，木标准溶液在半年内稳定。

3.14标准工作溶液：临用时用60%甲醇水溶液将标准储备溶液稀释成含咖啡因5μg/L、10μg/L、

50pg/L、100μg/L、500μg/L的标准工作溶液。

3.15固相萃取柱：C固相萃取小柱(250mg,3mL)或相当者。使用前用5mL甲醇和5mL水预洗。

3.160.45μm滤膜，有机系。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱-四极杆串联质谱联用仪：配电喷雾(ESI)离子源。

4.2离心机：4000r/min。

4.3涡旋混匀器：200r/min～24000r/min可调。

4.4超声波清洗器。

4.5天平，感量为0.001g、0.0001g。

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SN/T2440—2010

5试样制备和保存

取代表性样品约500g,将其用力搅拌均匀，装入洁净容器内，密封，并标明标记，于一18℃以下保

存。在制样过程中，应防止样品受到污染或发生所测物质量的变化。

6测定步骤

6.1提取和净化

准确1g(准确到0.001g)混合均匀的样品于50mL离心管中，加入20mL水，于超声波清洗器上超声15min,冷却后加人2.5mL乙酸铅溶液，2.5mL草酸钾-磷酸氢二钠溶液，涡旋混匀器上混匀，于4000r/min离心5min后，取上清液过C?固相萃取柱，以1滴/s洗脱速度，用5mL水、5mL20%甲醇水淋洗后，负压抽干，用2.0mL60%甲醇水溶液洗脱并收集并定容至2.0mL,混匀后，过0.45μm滤

膜，供液相色谱-质谱/质谱法测定。

6.2测定

6.2.1液相色谱-四极杆串联质谱条件

a)色谱柱：C??色谱柱(4.6×150mm,5μm)或相当者；

b)柱温：40℃;

c)流动相和洗脱程序见表1;流速：0.50mL/min;

表1流动相和洗脱程序

时间/min

0.1%甲酸/%

乙腈/%

0.00

98.0

2.0

3.00

98.0

2.0

8.00

30.0

70.0

12.00

30.0

70.0

12.01

98.0

2.0

20.00

98.0

2.0

d)进样量：10μL;

e)离子源：