《食用油中苯并[a]芘的测定酶联免疫吸附定量法》征求意见稿.docx

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食用油中苯并[а]芘的测定酶联免疫吸附定量法

1范围

本文件规定了酶联免疫吸附定量法测定食用油中苯并[а]芘的原理、试剂、仪器、试样制备、分析步骤、结果计算和精密度等。

本文件适用于大豆油、菜籽油、花生油等食用油中苯并[а]芘的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T5524动植物油脂扦样

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

本方法采用免疫竞争法原理。试样经正己烷稀释，分子印迹小柱提取并净化，浓缩至干，甲醇溶解并稀释后通过酶联免疫吸附定量法测定，利用抗原抗体特异性结合的免疫反应对苯并[а]芘含量进行测定。

5试剂和材料

除非另有说明，本方法所用的试剂均为分析纯，试剂配制用水为GB/T6682规定的二级水。

5.1试剂

5.1.1甲苯（C7H8）：色谱纯。

5.1.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。

5.1.3二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。

5.1.4正己烷（C6H14）：色谱纯。

5.1.5甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.6样本稀释液：由酶联免疫吸附定量检测试剂盒配套提供，或根据产品说明书配制。

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5.2标准品

苯并[a]芘标准物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度不小于99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

表1苯并[a]芘标准物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量

中文名称

英文名称

CAS登录号

分子式

相对分子质量

苯并[а]芘

Benzo(a)pyrene

50-32-8

C20H12

252.32

警示——苯并[a]芘是一种已知的致癌物质，测定时应特别注意安全防护！测定应在通风柜中进行并戴手套，尽量减少暴露。如已污染了皮肤，应采用10%次氯酸钠水溶液浸泡和洗刷，在紫外光下观察皮肤上有无蓝紫色斑点。

5.3标准溶液配制

5.3.1苯并[a]芘标准储备液(100μg/mL)：准确称取苯并[a]芘标准品1mg（精确到0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲苯溶解，定容。溶液转移至试剂瓶中后，在－20℃下避光保存，保存期1年。

5.3.2苯并[a]芘标准中间液(1.0μg/mL)：吸取100μL苯并[a]芘标准储备液(100μg/mL)，用乙腈定容到100mL。此溶液密封后避光－20℃下保存，3个月有效。

5.3.3苯并[a]芘标准工作液：把苯并[a]芘标准中间液（1.0μg/mL）用甲醇稀释得到浓度为0.2μg/mL,0.6μg/mL,1.8μg/mL,5.4μg/mL,16.2μg/mL的标准品，临用现配。

5.4材料

5.4.1苯并[a]芘分子印迹柱：500mg，6mL。使用前依次用7mL二氯甲烷及6mL正已烷活

化。

5.4.2苯并[a]芘酶联免疫吸附定量检测试剂盒：需冷藏储存，具体储存条件参照使用说明

书。

6仪器

6.1分析天平：感量为0.01g和0.00001g。

6.2移液器：10μL，100μL，1mL。

6.3漩涡混匀仪。

6.4氮气或空气吹干装置（带温度控制）。

6.5恒温震荡孵育器。

6.6酶标测定仪。

7试样制备与保存

7.1制样

样品按照GB/T5524进行扦样和取样。

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7.2保存

试样于（0～4）℃冰箱中避光保存。

8分析步骤

使用不同厂商的试剂盒，在样品提取和测定的操作方面可能略有不同，应该按照供应商所提供的操作说明书要求进行操作。

警示——整个分析操作过程应在指定区域内进行。该区域应避光（直射阳光）、具备相对独立的操作台和废弃物存放装置。在整个实验过程中，实验废弃物应按照接触有毒物的要求分类存放。

8.1样本前处理

8.1.1样本稀释：称取1g（精确到0.01g）试样，加入8mL正己烷，待净化。

8.1.2提取并净化：将待净化液转移进已活化柱子，待液面降至柱床时，用6mL正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。将净化液在40℃下氮气或空气吹干，准确吸取1mL甲醇涡旋复溶0.5min。准确吸取5