不同酿酒酵母体外模拟胃肠道内环境适应性研究.docx

不同酿酒酵母体外模拟胃肠道内环境适应性争论

龚发源;徐智鹏;陈毛清;曹诗国;熊锋;曾雨雷;胡骏鹏

【期刊名称】《《中国饲料》》

【年(卷),期】2023(000)019

【总页数】4页(P120-123)

【关键词】酿酒酵母;人工胃液;人工肠液;适应性

【作者】龚发源;徐智鹏;陈毛清;曹诗国;熊锋;曾雨雷;胡骏鹏

【作者单位】安琪酵母股份湖北宜昌443003;安琪酵母(崇左)广西崇左532201

【正文语种】中文

【中图分类】S816.7

从20世纪初开头，饲用益生菌以其无毒副作用、无残留、无环境污染、能有效提高动物生产性能而被广泛争论并用于动物生产。目前用于畜禽饲料的益生菌，主要包括芽孢杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌、片球菌、链球菌等革兰氏阳性菌以及酿酒酵母菌、克鲁维酵母菌等〔Anadon等，2023〕。其中酿酒酵母是安全使

用时间较长且具有显著益生作用的饲用微生物，其菌体蛋白质含量高达 50%以上，在畜牧业中始终作为单细胞蛋白的主要来源而被广泛使用〔聂琴，2023〕。此外

酿酒酵母作为益生菌可以提高动物对饲料干物质、纤维素、半纤维素、蛋白质等有机物和磷酸的消化率，还能提高饲料中矿物质利用率，有助于动物充分利用饲料中

的养分，同时还能有效改善家畜肠胃的菌群构造〔潘宝海等，2023；王学东等，

2023〕、吸附肠道病原菌〔Tiago等，2023〕、增加家畜的免疫力和抗病力

〔Halas等，2023〕等。

然而，动物胃肠道中存在的胃酸、胆盐及各种消化酶类是自然存在的屏障，饲用益生菌能否在动物消化道中发挥生理功能，首要在于能否有效抵抗胃肠道的自然屏障，在消化道内定植或者保持有效活菌含量。因此，本争论选取多种酿酒酵母菌株，建立体外模拟胃肠道环境模型，对酿酒酵母菌株在模拟胃肠道环境中的适应性进展评价，为饲用酿酒酵母科学有效的使用供给理论依据。

材料与方法

材料

试验菌株酿酒酵母菌株及活性干酵母样品：Sc1、Sc2、Sc3、Sc4均由安琪酵母股份供给，其中Sc1菌株保存于安琪酵母股份生物技术争论院菌种保藏中心，菌种编号BW；Sc2、Sc3、Sc4保存于武汉大学中国典型培育物保藏中心〔CCTCC〕，菌种编号分别为CCTCCM2051226、CCTCCM2023460、CCTCCM2023116。

培育基及主要试剂酵母膏胨葡萄糖〔YPD〕液体和固体培育基：1%酵母提取物，2%蛋白胨，2%葡萄糖，溶解于1L蒸馏水中，假设制固体培育基，参加2%琼脂粉，灭菌待用。

猪胆盐〔胆酸含量≥65%〕，购自北京奥博星生物技术；胃蛋白酶〔酶活力≥1200U/g〕、胰蛋白酶〔酶活力≥5000U/g〕，氯化钠、浓盐酸、氢氧化钠等化学试剂〔生化级〕，购自国药集团化学试剂。

试验方法

菌种活化从4℃冰箱中取出斜面培育基保存的酿酒酵母菌株，室温解冻后，接种于YPD斜面培育基进展活化，再将活化好的菌种接种到YPD液体培育基进展

扩培。培育至对数生长期末期后作为活化酵母菌悬液，待用。

37℃生长试验将活化的菌悬液接种于YPD液体培育基〔pH自然〕，接种量1‰，37℃下摇床培育，0、4、8、12、24h后进展活菌计数〔cfu/mL〕。

酸性环境适应性试验将活化的菌液接种于不同pH液体培育基〔pH1.0、2.0、3.0、4.0〕，使用自然pH作为比照，接种量1‰，最适生长温度下摇床培育，24h后进展活菌计数〔cfu/mL〕。

人工胃液配制取质量浓度为0.1kg/L的盐酸16.4mL，加蒸馏水稀释，调整温度为25℃，用pH计周密调整pH为2.0。然后参考GB/T17811-1999相关方法，参加生化级胃蛋白酶〔1%〕，充分溶解后，用孔径0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即为人工胃液。

人工肠液配制Na2HPO41.36g，加水100mL溶解，用0.1kg/L盐酸溶液调整pH至6.8，加水稀释至200mL，121℃灭菌15min，然后参加0.3%胆盐和0.1%生化级胰蛋白酶，充分溶解后用孔径0.22μm微孔滤膜过滤除菌，冷藏备用。

活菌培育计数用无菌生理盐水对样品进展10倍梯度稀释，每支样品选择3

个稀释梯度，每个稀释度3个重复，承受平板计数法，吸取0.1mL进展无菌涂布，静置15min后30℃倒置恒温培育24h，计数有效数在30～300个的平板菌落数，然后将结果换算成cfu/mL。

数据处理试验数据以“平均数±标准差”表示，承受SPSS18.0统计软件中的one-wayANOVA进展单因素