SNT 1961.18-2013 出口食品过敏原成分检测 第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分.docxVIP

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SN/T1961.18—2013

出口食品过敏原成分检测

第18部分：实时荧光PCR

方法检测荞麦成分

Detectionofallergencomponentsinfoodforexport—Part18:RealtimePCRmethodfordetectingbuckwheatcomponents

2013-03-01发布2013-09-16实施

中国家华质量人监检检总发布

I

SN/T1961.18—2013

前言

SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分——第1部分：酶联免疫法检测花生成分；

—-第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；

——第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；

——第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；

——第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分； 第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；

第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分； 第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；

——第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；

——第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；——第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；

——第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分； 第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；——第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；

第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；——第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；

——第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；——第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；

——第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第18部分。

本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。

本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。

本部分主要起草人：张舒亚、刘金华、陈颖、高琴、刘月明、李妮、张佳谊、徐宝梁。

SN/T1961.18—2013

出口食品过敏原成分检测

第18部分：实时荧光PCR

方法检测荞麦成分

1范围

SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原荞麦成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原荞麦成分的定性检测。

本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%质量分数)。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27403实验室质量控制规范一食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

过敏原allergen

又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。

3.2

荞麦buckwheat

别名乌麦、花麦、三角麦，属蓼科(Rolygonacesa)荞麦属(Fagopyrum),学名Fagopyrumesculen-

tum。

3.3

实时荧光PCRrealtimePCR

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。

3.4

Ct值cyclethreshold

每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。

4方法提要

样品经研磨后，提取DNA,以DNA为模板，采用荞麦ITS和5.8SrRNA核苷酸特异片段检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在过敏原荞麦成分。

工

2

SN/T1961.18—2013

5试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

5.1检测用引物(对)序列和探针：荞麦成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。

表1试验用引物和探针

名称

序列(5-3’)

目的基因

内参照5端引物

内参照3端引物

内参照探针

TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA

AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT

FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC

C