rna干扰完整解析.ppt

RNA的干扰;RNA的干扰;什么是RNA干扰？;RNA干扰的发現;;;RNAi的作用机制;RNAi机制;目前，RNAi的作用机制重要是在线虫、果蝇和拟南芥等生物体内阐明的。生物体由于RNA病毒入侵、转座子转录、基因组中反向反复序列(invertedrepeats)转录及外源基因导入等原因，细胞中可出現dsRNA分子。

當多种原因产生的dsRNA在细胞中出現時，细胞中壹组特定蛋白复合物可识别dsRNA，此阶段需要Rde-1、Rde-4和dsRNA特异性的核酸内切酶Dicer等共同参与。Rde-1,4编码的蛋白识别并引导dsRNA与Dicer結合，然後Dicer将dsRNA解旋，再将其裂解為21~25nt大小的小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)。;核酸内切酶;

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Dicer定位于胞浆中，但核内mRNA剪切修饰後，向核外运送過程中也存在RNAi現象，也許有其他类似功能的酶发挥作用。現认為21~25nt大小在3’端带有2~3個碱基悬端和5’端磷酸化的siRNA诱导的RNAi效应最强。;19ntduplex;siRNA具有低分子质量、低浓度、沉默信号可在细胞间传递甚至传播至整個有机体以及可遗传等特點。而不小于30bp的dsRNA可引起机体非特异性干扰素样反应和蛋白激酶(PKR)的激活而使其被降解，從而大大減少了其對mRNA的克制作用。

在RNAi启始過程中发挥酶切作用的Dicer酶属于RNaseⅢ核糖核酸酶家族中的第三個家族，该家族的RNase具有两個催化构造域，壹种螺旋酶及PAZ模体(motif)，其功能是特异地将dsRNA降解成siRNA，因此，Dicer酶被认為是启動RNAi效应的关键。然而，令人费解的是，為何Dicer酶的降解产物是21nt~23nt的siRNA呢?近来對RNaseⅢ催化构造域的构造的研究使其真相大白。;Dicer

壹种核酸酶,负责将dsRNA转化為siRNA：

它属于RNaseⅢ家族,具有两個催化构造域、壹种解旋酶(helicase)构造域和壹种PAZ(Piwi/Argonaute/Zwille)构造域,Dicer在催化過程中以二聚体的形式出現,其催化构造域在dsRNA上反平行排列,形成四個活性位點,但只有两侧的两個位點有内切核酸酶活性,這两個位點在相距约22bp的距离切断dsRNA,多种生物体内Dicer构造略有不壹样,致使siRNA長度存在微小差异。;;ModelsforDicercleavage;启始阶段;;mRNA被核酸外切酶或核酸内切酶降解;;(2)RNA诱导的沉默复合物形成阶段;RNA诱导的沉默复合??(RNA-inducedsilencingcomplex，RISC);(3)效应阶段;效应阶段;RISC;

RISC

RNA-inducedSilencingComplex;(4)扩增阶段;RNAi扩大效应;目前，對這些現象的解释至少有四种机制：;移行RNAi;

应用：

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;;;3）肿瘤治疗;4）药物開发;

RNA干扰存在的問題

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