《3.2 基因工程的基本操作程序》讲义案.docxVIP

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3.2基因工程的基本操作程序

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课程标准

目标解读

基因工程是一种重组DNA技术。

阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤。

阐明基因工程的原理和基本操作程序。

针对人类生产或生活中的某一需求，选取适当的基因工程的技术和方法，尝试设计获得某一转基因产品的方案。

尝试进行PCR的基本操作并用电泳鉴定PCR的产物。

课前预习

课前预习

一、目的基因的筛选与获取

1．目的基因

(1)概念：用于改变或获得等的基因。

(2)实例：培养转基因抗虫棉用到的目的基因是。

2．筛选合适的目的基因

(1)较为有效的方法：从相关的和的基因中进行筛选。

(2)实例：在培育转基因抗虫棉之前，科学家不仅掌握了Bt基因的，也对Bt基因的表达产物——有了较为深入的了解。

(3)认识基因结构和功能的技术方法：技术、数据库、工具。

3．利用PCR获取和扩增目的基因

(1)PCR的含义：PCR是的缩写，它是一项根据的原理，在体外提供的各种组分与反应条件，对进行大量复制的技术。

(2)原理：

(3)条件：

参与的组分

在DNA复制中的作用

解旋酶(体外用代替)

打开DNA双链

DNA母链

提供的模板

合成DNA子链的原料

催化合成DNA子链

引物

使能够从引物的端开始连接

维持反应体系pH稳定

（4）过程：PCR过程包括三步（填图）

(5)结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成形式扩增(约为，其中n为数)。

提醒：

①在PCR过程中实际加入的为dNTP(即dATP、dGTP、dTTP、dCTP)，既可作为合成DNA子链的原料，又可为DNA的合成提供能量。

②引物既可以是DNA单链，也可以为RNA单链。细胞内的DNA进行复制时，也需要引物，一般为RNA片段。

③真核细胞和细菌的DNA聚合酶都需要Mg2＋激活。因此，PCR反应缓冲溶液中一般要添加Mg2＋。

二、基因表达载体的构建——核心

1．构建基因表达载体的目的

(1)使目的基因在受体细胞中，并且可以给下一代。

(2)使目的基因能够和发挥作用。

2．基因表达载体的组成[填图]

3．构建过程[填图]

易错易混辨析：

1.目的基因就是指编码蛋白质的基因()

2.从已知结构和功能清晰的基因中筛选目的基因是获取目的基因的一种有效方法。（） (√)

3.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列()

4.用PCR方法扩增目的基因时需要设计两种引物()

5．Taq酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA连接酶。（）6．基因表达载体中启动子是DNA聚合酶识别和结合的部位。 ()

三、将目的基因导入受体细胞（注意：只有该步骤没涉及到碱基互补配对现象）

1．转化：目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内和的过程。

2．目的基因导入受体细胞的方法

(1)目的基因导入植物细胞

①法

Ⅰ.用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入中。

Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借花粉管通道进入