《药物分离与纯化技术》课件——第六章.pptxVIP

双语在线开放课程;6.1;;三种人参皂苷制备色谱图;（1）色谱图;←色谱峰;;←色谱峰;峰高：峰的最高点至基线的垂直距离。峰面积：色谱峰与基线所包围的面积。;峰底：峰的起点与终点之间连接的线段距离

峰宽：在峰两侧拐点处所作切线与基线相交两点之间的距离

半（高）峰宽：通过峰高的中点作平行于基线的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离;高斯峰的特征宽度

Wi=拐点处的色谱峰度W1/2h—半峰宽Wb—峰宽;（2）分配系数比（?）;色谱分离中的四种典型情况：;分离度：相邻两个峰的保留时间之差与两峰宽度平均值之比。;《中国药典》2015年版规定：

作定量分析时，为了获得较好

的精密度和准确度，应使R≥1.5。

;;6.1-2;1;制备规模(100mg～20g);气相色谱;;(2)液相色谱;图6;图8中压制备液相色谱仪;Waters2695一体式高效液相色谱;3.;4.;;图12;5.;气相色谱;6.2;1;1.;纸巾通过毛细作用吸收液体;纸层析操作过程;;2.;（1）薄层的制备;薄板的制备;各种型号硅胶板区别;(2)点样;(3)展开;上行展开;常见溶剂的极性大小：

石油醚（Ⅰ类，30~60℃）＜正己烷＜石油醚（Ⅱ类，60~90℃）＜环己烷＜二硫化碳＜四氯化碳＜甲苯＜苯＜二氯乙烷＜二氯甲烷＜氯仿＜乙醚＜乙酸乙酯＜正丁醇＜四氢呋喃＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜二甲基甲酰胺（DMF）＜乙腈＜甲醇＜水吡啶乙酸;溶剂体系的配制;待测组分的Rf在0.2～0.8之间;仅仅考虑溶剂的极性大小排列顺序;;3.;6.3;柱层析是按固定相的承载方式分类;简易层析装置;层析操作装置图;01;柱层析三要素;吸附柱层析原理形象化解释;02;吸附介质具备条件;6.4;离子交换柱色谱操作示意图;胰岛素离子交换柱色谱装置;01;当蛋白质为阴离子时，在pH5.5-9.0的范围内，可选择DEAE纤维素;平衡缓冲液的用量----至少2BV;进样量--------介质交换容量的10-20%；;恒定洗脱;梯度洗脱;pH值离等电点越远，所带净电荷越大;1.有一蛋白质混合物，分子量相近，等电点分别为：A=9.7；B＝6.8；C＝4.5；

D＝8.5；E＝7.0。选择用CMC-纤维素离子交换柱分离纯化，用pH=3缓

冲溶液中平衡柱子。如果用逐步增加洗脱液pH值的方法来进行梯度洗脱，

则各蛋白质的洗脱顺序为（）;6.5;01;02;

;Vt：柱床“总容积”；

Vo：即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙

之间的水相容积；

Vi：即凝胶颗粒内部所含水相的容积；

Vg：凝胶本身的容积；;

;

;五、;;1.脱盐;;胰岛素凝胶柱层析装置;2.在凝胶层析柱中分离某有效成分时，洗脱体积为140ml,其外水体积和

总体积分别为60和200ml，求分配系数是多少？（凝胶体积忽略）;6.6;亲和层析：利用共价连接有特异配体的层析介质，分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白质或其他分子的层析技术。;2.生物大分子的识别功能;应用分离纯化酶、抗原、抗体.

分离纯化核酸.

研究酶的结构与功能.

;（1）待分离物质与配体专一性结合，分辨率高，操作简单，通过一次性操作即可得到较高纯度的分离物质。

（2）具有浓缩作用，可以从含量很低的溶液中得到高浓度的样品，有的纯化倍数达几千倍。

（3）利用生物学的特异性进行分离，所以分离条件比较温和，能够很好地保持样品原有的生物学性质

;04;①有机小分子类主要有苯基类、烷基类、氨基酸类、核苷酸类等。

②生物大分子类主要有酶类、抑制剂类、蛋白质、抗原抗体类等。

③染料类主要有蓝色葡聚糖、荧光染料等;纤维素(cellulose)

葡聚糖凝胶(sephadex)

聚丙烯酰胺凝胶(Bio-Gel)

多孔玻璃(Bio-Glass)

琼脂糖凝胶(sepharose)

聚丙烯酰胺-琼脂糖凝胶(Ultro-gel);常用的几种活化剂：

溴化氰(CNBr)

环氧氯丙烷

1，4-丁二醚

戊二醛、高碘酸盐等。;

;配体必备条件：

①能与活化剂的活化基团发生偶联作用，偶联后不影响配体和目标分子的专一结合特性。

②专一亲和性要强，能有效地分离目标分子。

③配体与目标分子结合后，在一定条件下能够被解吸附，且不破坏目标分子的生物活性。

④在分离过程中配体与目标分子无空间阻碍。;;理想载体的特性：

①不溶于水，但具有高度亲水性