胶体金法检测牛奶成分.docxVIP

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食品中过敏原成分检测方法

第二部分:胶体金法检测牛奶成分

1范围

T/xxx的本部分规定了食品中过敏原牛奶成分的胶体金法。

本部分适用于生产加工设备表面环境采样以及清洗水中的牛奶残留成分验证，也可用于部分食品原料及终产品中过敏原牛奶成分的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

过敏原allergen

能够诱发机体产生过敏反应的抗原物质，又称为致敏原、变态反应原。

3.2

食品过敏原foodallergen

普通食品中正常存在的天然或人工添加物质，过敏体质人群食用后会诱发其过敏反应。

4检测原理

本方法基于抗原抗体反应、胶体金标记技术及毛细管层析技术。试样中的牛奶蛋白抗原在层析过程中与胶体金标记的特异性抗体结合。试剂条上检测线和过载线的颜色深浅与样品中牛奶蛋白的含量相关，可根据检测线和过载线的颜色变化通过目视进行结果判定。

5试剂与材料

5.1牛奶胶体金试剂盒

参见附录A。

5.2食品提取缓冲液

参见附录A。

6仪器与设备

6.1电子天平：感量0.1g。

6.2研钵及粉碎装置。

6.3涡旋振荡器。

6.4微量可调单通道移液器:量程200μL~1000μL。

7检测方法

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7.1食品试样的提取与测试

7.1.1取2g研磨好的固体食品试样(或2mL液体食品试样)加到离心管中,每个样品同时做两份平行样。

7.1.2在每个离心管中加入20mL（对固体样品）/18mL（对液体样品）食品提取缓冲液。

7.1.3盖上盖子，剧烈振荡1min混匀。

7.1.4离心管倾斜约45°,将试剂条浸入离心管中，确保试剂条圆形一端完全被液体浸没。

7.1.5当液体层析进入测试窗口时，取出试剂条并放置在水平桌面上，5min后目视读取结果。

7.2清洗水试样的提取与测试

7.2.1将一袋Type8提取液撕开，全部倒入样品管内。

7.2.2向样品管中加入1mL清洗水样品，盖上盖子，剧烈振荡1min后，将混匀的液体倒满样品管盖。

7.2.3将试剂条浸入管盖内液体，确保试剂条圆形一端完全被液体浸没。

7.2.4当液体层析进入测试窗口时，取出试剂条并放置在水平桌面上，5min后目视读取结果。

7.3表面涂抹试样的提取与测试

7.3.1将一袋Type8提取液撕开，全部倒入样品管内。

7.3.2使用棉签拭子涂抹10cm×10cm大小的环境表面。如果是干燥表面，涂抹前需将拭子用Type8提取液润湿。

7.3.3将拭子头折断放入样品管内，盖上盖子，剧烈振荡1min后，将混匀的液体倒满样品管盖。

7.3.4将试剂条浸入管盖内液体，确保试剂条圆形一端完全被液体浸没。

7.3.5当液体层析进入测试窗口时，取出试剂条并放置在水平桌面上，5min后目视读取结果。

8结果判读

8.1无效

质控线不显色,说明此试剂条无效，需重新检测。

8.2阴性

质控线显色,过载线显色,检测线不显色，判为阴性。

8.3阳性

质控线显色,过载线显色,检测线显色，判为阳性。

8.4强阳性

质控线显色,过载线不显色,检测线不显色或轻微显色，判为强阳性。

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附录A

（资料性）

过敏原成分定性检测试剂盒

A.1牛奶胶体金试剂盒

本标准使用的牛奶胶体金试剂盒为美国Neogen公司产品,试剂盒包括:

a)10个胶体金试剂条；

b)10袋Type8提取液;

c)10个样品管（含盖）;

d)10个棉签拭子。

A.2食品提取缓冲液

本标准使用的Reveal3-D食品提取缓冲液为美国Neogen公司产品。

A.3试剂盒检出限

食品/清洗水采样:5μg/mL(g)牛奶成分；

环境采样:20μg牛奶成分/100cm2。