原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
1
真菌及其制品中麦角甾醇的测定---高效液相色谱法
1范围
本标准规定了麦角甾醇的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于真菌及其制品中麦角甾醇的测定。
本标准的检出限为4mg/kg，定量限为12mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样经水解液皂化后，用石油醚萃取，萃取液浓缩后用甲醇-三氯甲烷溶液(1+1)溶解、定容，滤膜过滤后用高效液相色谱仪紫外检测器在282nm处检测，外标法定量。
4仪器和设备
4.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。
4.2粉碎仪。
4.3恒温水浴锅。
4.4旋转蒸发仪。
5试剂与材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水为GB/T6628规定的三级水，色谱用水为GB/T6682规定的一级水。
5.1石油醚：沸程为30℃~60℃。
5.2甲醇：色谱纯。
5.3三氯甲烷：分析纯。
5.4氢氧化钠：分析纯。
2
5.5水解液：称取50.0g氢氧化钠，加入50mL水，搅拌使氢氧化钠充分溶解，然后加入950mL甲醇，混匀。
5.6甲醇-三氯甲烷溶液(1+1)：量取200mL甲醇，加入200mL三氯甲烷，混匀。
5.7麦角甾醇:纯度≧98%。
5.8标准储备液:准确称取0.01g麦角甾醇标准品，用乙醇溶解并定容至10mL，此溶液每毫升相当于含1mg麦角甾醇，4℃保存备用。
5.9标准工作液：准确吸取标准储备液0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.80mL、1.20mL、1.60mL于10mL棕色容量瓶中,用甲醇-三氯甲烷溶液(1+1)定容至刻度，该标准系列中麦角甾醇浓度为10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、120μg/mL、160μg/mL。
5.10滤膜：0.45μm，有机相。
6样品制备
6.1子实体或菌丝体需粉碎后使用，液体试样直接使用。
6.2称取试样约0.5g（精确至0.001g），置于100mL具塞密封玻璃容器中，加入40mL水解液，混匀后于80℃水浴锅皂化1.0h，皂化后立即用冷水冷却至室温。
6.3将皂化液用少量水转移到250mL的分液漏斗中，加入50mL石油醚，振荡萃取，将下层溶液转移至另一250mL的分液漏斗中，加入50mL的石油醚再次萃取，合并醚层。
6.4将洗涤后的醚层并入蒸发瓶内，并将其接在旋转蒸发仪上，于50℃水浴中减压蒸馏浓缩，待瓶中醚液近干时，取下蒸发瓶。用甲醇-三氯甲烷溶液(1+1)将蒸发瓶中残留物溶解并转移至10mL棕色容量瓶中，定容至刻度。溶液过0.45μm有机系滤膜后供高效液相色谱测定，可根据具体试样进行稀释。
7色谱测定
色谱参考条件列出如下：
a)色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒度5μm；或相当者；
b)柱温：37℃;
c)流动相：纯甲醇；
d)流速：1.0mL/mL；
e)紫外检测波长：282nm；
f)进样量：10μL。
8结果计算
试样中麦角甾醇的含量按式（1）计算：
X=m00 (1)
式中：
X——试样中麦角甾醇的含量，单位为毫克每克（mg/g）；
3
c——由标准曲线得到样品溶液中麦角甾醇的含量，单位为微克每毫升(μg/mL）；V——样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）；
m——样品质量，单位为克（g）；
计算结果保留三位有效数字。
9精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的10%。
4
附录A
（资料性附录）
麦角甾醇标准品色谱图
mAU
麦角甾醇100
麦角甾醇
75
75
50
25
0
0.02.55.07.510.012.515.0min
图A.1麦角甾醇标准品色谱图（浓度80μg/mL）
文档评论（0）