GhD14在棉花抗黄萎病中的功能研究.pdf

摘要

棉花作为世界上几种重要的经济作物之一，在中国的发展历史中占有重要地位。但

黄萎病的胁迫使得棉花的品质和产能低下，而传统应对黄萎病的措施少且效果不显著。

因此，解决棉花黄萎病的关键是找到对黄萎病菌诱导响应的棉花基因，并验证出该基因

的抗病机制，从而进一步培育出抗黄萎病的棉花新品种。独脚金内酯（strigolactone）

是被最新被证明的一种新型植物激素，虽然这种激素最早从棉花根的分泌物中分离出来

，但是该种激素如何参与棉花响应黄萎病菌并不清晰。

本研究以独脚金内酯与棉花黄萎病之间的关系为研究方向，通过大丽轮枝菌诱导基

因表达分析筛选出棉花独脚金内酯受体基因GhD14，对该基因进行功能验证，找出互

作蛋白并解析其抗病机制。本论文的主要研究成果如下：

1.通过对中棉所24棉花品种分别接水和大丽轮枝菌处理，按不同时间点取样进行

GhD14基因诱导表达模式分析，结果发现GhD14基因被明显诱导表达，与对照组相

比GhD14基因在6h和9h表达量最高。

2.通过在线网站对GhD14基因和编码的蛋白结构进行分析，结果显示GhD14编

码独脚金内酯的受体蛋白，属于α/β折叠水解酶，进化树分析显示陆地棉GhD14与海

岛棉亲缘关系较近，多重序列比对结果表明不同物种之间具有至少两处保守序列，推测

这两处保守序列是水解酶发挥功能的重要作用位点。

3.通过VIGS技术将陆地棉基因GhD14沉默，并进行接菌处理，结果证明GhD14

沉默后棉花对黄萎病的抗性增强，说明基因GhD14负调控棉花对黄萎病菌的抗性。

4.对拟南芥野生型WT和缺失突变体d14同时接菌处理，结果显示突变体d14

对黄萎病病菌不敏感；将陆地棉GhD14基因回补至拟南芥缺失突变体d14并接菌处

理后，发现回补拟南芥株系对大丽轮枝菌敏感，进一步验证GhD14负调控棉花对黄萎

病菌的抗性。

5.利用在线网站预测互作蛋白GhBZS1，并通过荧光素酶互补图像检测、酵母双杂

、双分子荧光互补以及免疫共沉淀实验，证明GhD14与GhBZS1在植物体内体外均

存在互作关系。

6.同样利用VIGS技术在中棉所24号棉花中将基因GhBZS1沉默，做接菌处理，

发现沉默植株对黄萎病的抗性降低；将拟南芥缺失突变体bzs1接菌处理后发现突变体

bzs1表现出对黄萎病敏感，证明GhBZS1基因正调控棉花对黄萎病的抗性。

综上所述，棉花独脚金内酯的受体基因GhD14受大丽轮枝菌诱导表达，负调控棉

花对黄萎病的抗性，其互作基因GhBZS1正调控棉花对黄萎病的抗性。研究结果不仅有

利于丰富棉花抵御黄萎病的理论体系，还为农业生产中黄萎病新品种的选育提供种质资

源。

关键词：黄萎病，大丽轮枝菌，GhD14，独脚金内酯

ABSTRACT

Cotton,oneofseveralimportantcashcropsintheworld,occupiesanimportantplaceinthe

developmenthistoryofChina.However,cottonhasbeenundertheduressofverticilliumwilt,whichleads

tothebottomqualityandproductivityofcotton,whilethetraditionalmeasurestocopewithverticilli