基因组学理论课 第10章蛋白质组学.ppt

真空系统质谱仪的离子源、质量分析器和检测器必须在高真空状态下工作，以减少本底的干扰，避免发生不必要的离子-分子反应。所以质谱反应属于单分子分解反应。利用这个特点，我们用液质联用的软电离方式可以得到化合物的准分子离子，从而得到分子量。由机械真空泵(前极低真空泵)，扩散泵或分子泵(高真空泵)组成真空机组，抽取离子源和分析器部分的真空。只有在足够高的真空下，离子才能从离子源到达接收器，真空度不够则灵敏度低。在不破坏真空度的情况下，使样品进入离子源。气体可通过储气器进入离子源。易挥发的液体，在进样系统内汽化后进入离子源。难挥发的液体或固体样品，通过探针直接插入离子源。进样系统分子失去电子，生成带正电荷的分子离子分子离子可进一步裂解，生成质量更小的碎片离子M+eM+.+2eM-.小于1%M+.A+.++B+CD++.中性分子或碎片R?.50-70eV离子源离子源（Ionsource）质谱仪的离子源种类主要有：化学电离源(ChemicalIonization,CI)快原子轰击源（FastAtomicbombardment,FAB）电喷雾源(ElectronsprayIonization，ESI)大气压化学电离源(AtmosphericpressurechemicalIonization,APCI)大气压光学电离源（Atmosphericpressurephotoionization,APPI）基质辅助的激光解吸电离源（MALDI-TOF）电子电离源(ElectronIonizationEI)每一种电离方法都有一定的分子量检测范围

EI/CIESI/FABAPPIAPCIMW100,00010,000100010010PolarityVeryPolarNonpolar电喷雾质谱技术和基质辅助激光解吸附质谱技术是诞生于80年代末期的两项轨电离技术。这两项技术的出现使传统的主要用于小分子物质研究的质谱技术发生了革命性的变革。它们具有高灵敏度和高质量检测范围，使得在pmol的水平上准确地分析分子量高达几万到几十万的生物大分子成为可能，并得到迅速的发展。被称做是“软”电离技术，因为：他们在离子化过程中不会破坏分子结构，能实现分子量大于10,000质量单位的生物大分子的质量分析电喷雾源(ESI)待测分子溶解在溶剂中，以液相方式通过毛细管到达喷口。在喷口高电压作用下形成带电荷的微滴，随着微滴中的挥发性溶剂蒸发，微滴表面的电场随半径减少而增加，到达某一临界点时，样品将以离子方式从液滴表面蒸发，进入气相。这一过程即实现了样品的离子化，没有直接的外界能量作用于分子，因此对分子结构破坏较少，是一种典型的“软电离”方式。其他特点

可形成多电荷离子，因此在较小的m/z范围内可以检测到大分子质量的分子。采用电喷雾质谱目前可测定分子质量100kDa以下的蛋白质，最高可达150kDa。由于离子蒸发使电喷雾质谱采用液相方式进样，因此可与蛋白质化学中常用的液相色谱联用，即液相色谱-电喷雾质谱(LC-ESIMS)，蛋白质或多肽经过高效液相色谱分离后，直接进入质谱进行分子质量测定。在常规电喷雾质谱中，喷雾的过程易形成较大液滴，液滴中的样品分子在离子源就不能完全离子化，从而降低了样品的利用率和灵敏度。基质辅助激光解析电离是利用固体基质分子均匀的包埋样品分子，在激光的照射下，基质分子吸收激光能量而蒸发，携带样品分子进入气相，进一步将能量传递给样品分子，从而实现样品分子离子化。由于样品的电离过程是由基质介导的，因此基质的选择对分子离子化有很大的影响,继而影响到分析的灵敏度、分辨率和精确度。合适的基质应该是保证待测物的离子化，而且基质本身的离子造成的背景较弱。MALDI最大的特点是离子电荷通常为1-2个，而不象ESI中为多电荷离子，对分子质量较大的样品而言，不会形成复杂的多电荷图谱，因而对图谱的解析比较清楚。质量分析器(Massanalyzer)是质谱仪中将离子按质荷比分开的部分,离子通过分析器后,按不同质荷比(M/Z)分开,将相同的M/Z离子聚焦在一起,组成质谱。种类：磁式单聚焦分析器磁式双聚焦分析器四极杆分析器离子阱分析器飞行时间分析器回旋共振分析器串接/联用……飞行时间分析器

（TimeofFlightMS,TOF-MS）TOF-MS的核心部分是一个无场的离子漂移管加速后的离子具有相同的动能?m/z小的离子，漂移运动的速度快，最先通过漂移管，到达检测器。