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文献解析|同一张冰冻切片中借助TissueCytometry单细胞原

位空间蛋白分析技术同步验证解析空间转录组的数据

引言

头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）是一种常见的恶性肿瘤，其治疗手段有限，尤其在晚期或转移性患者中，免疫疗法虽然为部分患者提

供了新的治疗希望，但反应率仍然较低。CD8+T细胞在肿瘤免疫治疗中扮演着重要角色，其浸润到肿瘤区域是免疫治疗成功的关键步骤

之一。然而，限制CD8+T细胞浸润的机制尚未完全明确。近期，上海市交通大学医学院附属第九人民医院张建军团队在CancerResearch

上发表了一项重要研究，揭示了HNSCC中一种特定的肿瘤相关成纤维细胞（CAF）亚群——MHC-IhiGal-9+CAF，能够限制CD8+T

细胞的浸润和抗肿瘤活性。本文将详细解析该研究的背景、方法、结果及其意义。

研究背景

免疫疗法在癌症治疗中逐渐崭露头角，特别是在晚期或转移性癌症患者中，提供了替代传统治疗的新选择。然而，HNSCC患者对免

疫疗法的反应率较低，限制了其疗效。CD8+T细胞作为细胞毒性T细胞，在肿瘤免疫中发挥着关键作用。它们能够识别并杀死被感染的

细胞或癌细胞，是免疫治疗中的核心效应细胞。然而，CD8+T细胞浸润到肿瘤区域，包括肿瘤床和肿瘤巢，是免疫治疗成功的关键步骤

之一，也是实体瘤免疫治疗的限制因素之一。

在HNSCC中，CAF是肿瘤微环境的重要组成部分，它们通过分泌多种细胞因子和趋化因子，影响肿瘤的生长、侵袭和转移。然而，

CAF在调节CD8+T细胞浸润和抗肿瘤活性方面的作用尚未完全明确。因此，深入研究CAF在HNSCC中的功能，特别是其对CD8+T

细胞的影响，对于提高免疫疗法的疗效具有重要意义。

研究方法

1.空间转录组分析

为了揭示HNSCC中CAF对CD8+T细胞浸润和抗肿瘤活性的影响，研究者首先对具有不同免疫浸润的HNSCC标本进行了空间转

录组分析。空间转录组技术是一种能够在组织原位检测基因表达的方法，能够揭示基因表达的空间分布和异质性。通过该技术，研究者

能够分析CAF和CD8+T细胞在肿瘤微环境中的分布和相互作用。

2.单细胞RNA测序

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为了更深入地了解CAF和CD8+T细胞的异质性，研究者对五对肿瘤和邻近组织进行了单细胞RNA测序。单细胞RNA测序是一种

能够在单个细胞水平上检测基因表达的方法，能够揭示细胞间的异质性和差异。通过该技术，研究者能够鉴定出与CD8+T细胞浸润限制

和功能障碍相关的特定CAF亚群。

3.TissueCytometry技术

尽管空间转录组技术和单细胞RNA测序提供了丰富的基因表达数据，但它们在蛋白水平上的验证仍然面临挑战。因此，研究者采用

了TissueCytometry技术，这是一种能够在单细胞分辨率下对原位组织进行多重免疫荧光定量分析的技术。该技术结合了精准的单细胞

识别算法、组织识别算法以及空间分布的关系算法，能够实现对原位转录组水平数据的精准验证。

为了克服冰冻切片在多重免疫荧光染色中的困难，研究者使用了TG配套多重免疫荧光染色试剂盒，并优化了漂白和洗脱步骤。通过

该技术，研究者能够在同一张冰冻切片上同步验证解析空间转录组的数据，实现了对CAF和CD8+T细胞在蛋白水平上的精准定量和分

析。

研究结果

1.鉴定出MHC-IhiGal-9+CAF亚群

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通过空间转录组分析和单细胞RNA测序，研究者鉴定出了一种特定的CAF亚群——MHC-IhiGal-9+CAF。这些CAF表现出高表

达的CXCLs（CXCL9、CXCL10、CXCL12