3.2基因工程基本操作程序 课件 高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

高中生物学选择性必修三生物技术与工程第2节基因工程基本操作程序第三章基因工程

第一步：目的基因的筛选与获录CONTENTS/05第二步：基因表达载体的构建第三步：将目的基因导入受体细胞第四步：目的基因的检测与鉴定DNA片段的扩增及电泳鉴定

问题1：请你猜测如何将抗虫基因转入棉花中？有哪些必须的步骤？一、目的基因的筛选与获取

抗虫棉Bt抗虫蛋白苏云金杆菌苏-基因1苏-基因2苏-基因3苏-基因4Bt基因苏云金杆菌DNA片段中的部分基因棉-基因1棉-基因2棉-基因3棉-基因4棉花细胞DNA片段中的部分基因“分子手术刀”“分子缝合针”实际操作和这一样都在体外进行吗？体外导入载体棉花细胞的DNA不进行切割DNA连接酶重组DNA限制酶1.目的基因的筛选和获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定问题2：什么是目的基因？问题3：除了抗虫棉，基因工程还有哪些应用？一、目的基因的筛选与获取

Bt毒蛋白基因是从苏云金芽孢杆菌中分离出来的抗虫基因。当害虫食用含有转基因的植物时，Bt基因编码的蛋白质会进入害虫的肠道，在消化酶的作用下，蛋白质能够降解成相对分子质量比解，最后造成害虫死亡。由于Bt毒蛋白对哺乳动物无毒害作用，因而广泛用于抗虫转基因植物。蛋白酶抑制剂基因广泛存在于植物中它生的抑制剂可与害虫消化道中的蛋白酶结合形复合物，从而阻断或降低蛋白酶的活性，使昆虫不能正常摄取、消化食物中的蛋白质。这种复合物还能刺激昆虫分泌过量的消化酶，引起害虫的厌食反应。淀粉酶抑制剂基因产生的粉酶抑制剂可以抑制昆虫消化道中的淀粉酶活性,使害虫不能消化所摄取的淀粉，从而阻断害虫的能量来源。植物凝集素基因控制植物合成一种糖蛋白糖蛋白可与昆虫肠道黏膜上的某种物质结而影响害虫对营养物质的吸收和利用。资料卡：可用于转基因植物的抗虫基因问题4：试想从何处筛选和获取目的基因？

问题5：试想从何处筛选和获取目的基因？问题6：选用苏云金芽孢杆菌的优势是什么？一、目的基因的筛选与获取

获取目的基因的常用方法有：人工合成从基因文库中获取利用PCR获取和扩增目的基因问题7：如何获得目的基因？一、目的基因的筛选与获取

基因组文库将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段，然后，将这些DNA片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。也就是说，这个群体包含了这种生物的所有基因，叫做这种生物的基因组文库。一、目的基因的筛选与获取

问题9：为什么不直接从苏云金芽孢杆菌的DNA中进行剪切，而还需要用PCR扩增？问题10：PCR技术的原理是什么？问题8：DNA复制需要哪些条件？PCR反应需要添加哪些试剂?一、目的基因的筛选与获取

问题11：PCR反应需要添加哪些试剂?一、目的基因的筛选与获取

问题12：什么是引物？有什么作用？一、目的基因的筛选与获取

一、目的基因的筛选与获取

问题13：根据半保留复制的原理描述PCR的扩增过程是如何的？判断1：PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应判断2：PCR扩增技术中，需用解旋酶使双链DNA解聚判断3：PCR过程使用的DNA聚合酶的特点是耐高温判断4：PCR技术中，DNA模板链上碱基G和C的比例越高，DNA变性解链的温度就越高一、目的基因的筛选与获取

问题14：PCR扩增的是完整的模板DNA分子吗？问题15：在第几轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段？比例是多少？不等长不等长不等长不等长等长等长第一轮第二轮第三轮第3轮；1/4不等长不等长一、目的基因的筛选与获取

问题16：猜想如何将基因导入到受体细胞中？问题19：为什么必须建构表达载体，而不直接将基因导入到受体细胞中？问题17：启动子=起始密码子吗？问题18：请你画出包含启动子和终止子的完整基因启动子：启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列终止子：给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列二、基因表达载体的构建

CA……UCCCUAAGGAUAGCCAUCCCAGAUG--ATGCATGCAT……CGATCGTAGCCA……TCCCTAAGGATAGCCATCCCAGATG……CATGCATCCATGC-----TACGTACGTA……GCTAGCATCGGT……AGGGATTCCTATCGGTAGGGTCTAC……GTACGTAGGTACG---某原核细胞基因非编码区非编码区编码区不编码mRNA不编码mRNA(编码mRNA)启动子终止子RNA聚合