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大鼠取材方案

??一、引言

大鼠作为生物医学研究中常用的实验动物，其取材对于深入了解各种生理病理过程、开展分子生物学及细胞生物学研究等具有至关重要的意义。合理、规范的取材方案能够确保获取高质量的组织样本，为后续实验提供可靠的基础。本方案详细阐述了大鼠取材的流程、方法及注意事项。

二、取材前准备

实验动物选择

1.品系：根据实验目的选择合适的大鼠品系，如SD大鼠常用于一般生物学研究，Wistar大鼠在毒理学研究中应用广泛等。

2.年龄与体重：依据实验设计确定大鼠的年龄和体重范围。例如，研究生长发育相关课题可能选用不同周龄的大鼠；而某些药物疗效观察实验，体重较为一致的大鼠有助于减少个体差异对实验结果的影响。

3.健康状况：选用健康的大鼠，外观应毛色光滑、活泼好动、眼睛明亮、无明显疾病症状。对大鼠进行预实验观察一段时间，确保其生理状态稳定后再进行取材。

实验动物饲养环境

1.温度与湿度：维持大鼠饲养环境的温度在2026℃，湿度在40%70%。适宜的温湿度条件有助于大鼠保持良好的生理状态，减少应激反应对实验结果的干扰。

2.光照周期：设定12小时光照/12小时黑暗的光照周期，模拟自然昼夜节律，保证大鼠正常的生物钟。

3.饲养笼具：使用符合大鼠饲养标准的清洁级或SPF级笼具，定期更换垫料，保持饲养环境清洁卫生，防止微生物感染影响大鼠健康。

实验动物处理

1.禁食禁水：根据实验要求，在取材前适当时间对大鼠进行禁食禁水。一般禁食1224小时，禁水46小时，以减少胃肠道内容物对取材组织的污染，同时避免过度脱水或饥饿导致大鼠生理状态改变。

2.麻醉：选择合适的麻醉方法对大鼠进行麻醉，常用的麻醉剂有戊巴比妥钠、水合氯醛等。以戊巴比妥钠为例，腹腔注射剂量一般为3050mg/kg体重。麻醉过程中密切观察大鼠的呼吸、心跳等生命体征，确保麻醉效果适度且大鼠处于安全状态。待大鼠麻醉至肌肉松弛、角膜反射迟钝，对疼痛刺激无明显反应时，方可进行取材操作。

3.固定：麻醉成功后，将大鼠仰卧固定于手术台上，可使用手术缝线或特制的固定装置固定四肢及头部，确保取材过程中大鼠体位稳定，便于操作。

取材所需器械与耗材准备

1.手术器械：准备锋利的手术剪刀、镊子、手术刀、骨剪等，确保器械清洁、无锈钝，提前进行高温高压灭菌或浸泡消毒处理。

2.取材容器：准备多个无菌的离心管、冻存管、培养皿等，根据取材组织的不同选择合适的容器。如用于RNA提取的组织样本需放入RNasefree的离心管中；用于蛋白质分析的样本可置于普通离心管或冻存管中。离心管和冻存管需提前标记好样本信息，包括大鼠编号、取材部位、取材时间等。

3.其他耗材：准备生理盐水、PBS缓冲液、固定液（如4%多聚甲醛、中性福尔马林等）、液氮罐、冰盒等。固定液需提前配制好，确保其浓度准确、新鲜，用于及时固定取材后的组织，防止组织自溶或降解。液氮罐和冰盒用于保存需要低温处理的样本，保证样本在取材后能迅速降温至合适温度，维持其生物学活性。

三、取材部位及方法

心脏取材

1.暴露心脏：在大鼠胸部正中做一纵行切口，依次切开皮肤、皮下组织、肌肉层，打开胸腔，暴露心脏。注意操作过程中避免损伤周围组织和血管。

2.取材：用眼科剪小心剪开心包膜，充分暴露心脏。可根据实验需要，分别取左心房、左心室、右心房、右心室组织。用锋利的眼科剪迅速剪下所需组织块，大小一般为0.51cm3，尽量保持组织的完整性，避免挤压或损伤组织细胞。取材后立即将组织放入盛有生理盐水或固定液的容器中。如果是用于分子生物学研究，可将组织迅速转移至RNasefree的离心管中，加入适量的TRIzol试剂，迅速冻存于液氮中或置于80℃冰箱保存备用。

肝脏取材

1.暴露肝脏：打开大鼠腹腔，找到肝脏，轻轻将其从周围组织中游离出来，注意避免损伤肝门处的血管和胆管。

2.取材：根据实验要求，选取肝脏不同叶或区域的组织。可使用手术剪刀在肝脏表面剪取组织块，同样注意组织块大小适中（约0.51cm3）。取材后，将组织样本放入装有固定液（如4%多聚甲醛）的容器中固定24小时左右，用于组织病理学检查；若用于其他实验，如蛋白质提取，可将组织迅速放入预冷的RIPA裂解液中，冰上匀浆后离心收集上清液，进行后续蛋白检测实验；若提取RNA，则将组织放入含有TRIzol试剂的离心管中，按RNA提取试剂盒说明书进行操作。

肺脏取材

1.暴露肺脏：打开胸腔后，小心分离出肺脏，注意不要损伤肺组织。

2.取材：可将肺脏整体取下，然后根据实验需要切成小块。例如，用于组织切片观察的肺组织块，大小约0.5cm×0.5cm×0.2cm，将其立即放入4%多聚甲醛固定液中固定；若要进行细胞培养，可将肺组织剪成12m