DNA的生物合成课件.pptVIP

後隨鏈的合成在複製叉同時合成前導鏈和後隨鏈複製過程簡圖原核生物基因是環狀DNA，雙向複製的複製片段在複製的終止點(ter)處匯合。oriterE.coli8232oriterSV40500三、複製的終止5?5?5?RNA酶OHP5?DNA-polⅠdNTP5?5?PATPADP+Pi5?5?DNA連接酶子鏈中的RNA引物被取代真核生物DNA生物合成過程TheProcessofDNABiosynthesisineukaryotes第四節真核生物複製子多、岡崎片段短、複製叉前進速度慢等；DNA複製從引發進入延伸階段發生DNA聚合酶?/?轉換；切除岡崎片段RNA引物的是核酸酶RNAseHⅠ和FEN1等。真核生物與原核生物DNA複製的差異：哺乳動物的細胞週期DNA合成期G1G2SM細胞能否分裂，決定於進入S期及M期這兩個關鍵點。G1→S及G2→M的調節，與蛋白激酶活性有關。蛋白激酶通過磷酸化啟動或抑制各種複製因數而實施調控作用。真核生物每個染色體有多個起始點，是多複製子複製。複製有時序性，即複製子以分組方式啟動而不是同步起動。複製的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）參與。還需拓撲酶和複製因數(replicationfactor,RF)。一、真核生物複製的起始與原核基本相似酵母複製起點為自主複製序列（autonomouslyreplicatingsequences，ARS）：酵母染色體含有多個複製起點。元件A(富含A/T的共有序列)：結合一個特異的蛋白質複合物──複製起點識別複合物(ORC)。3個序列(B1、B2和B3)可以增加複製起點的效率，其中B2的9個堿基與上述ARS共有序列相同。酵母複製起始點增殖細胞核抗原（proliferationcellnuclearantigen，PCNA）在複製起始和延長中起關鍵作用。PCNA為同源三聚體，具有與E.coliDNA聚合酶Ⅲ的β亞基相同的功能和相似的構象，即形成閉合環形的可滑動DNA夾子，在RFC的作用下PCNA結合於引物－範本鏈；並且PCNA使polδ獲得持續合成能力。PCNA水準也是檢驗細胞增殖的重要指標。拓撲異構酶，去除負超螺旋（使解旋酶容易解旋），去除複製叉前方產生的正超螺旋TolⅠ和TolⅡDNA雙螺旋解鏈，參與組裝引發體DNA解旋酶連接岡崎片段DNA連接酶Ⅰ核酸酶，切除RNA引物RNAseHⅠ核酸酶，切除RNA引物FEN1DNA複製，核苷酸切除修復，堿基切除修復Pol?/?合成RNA-DNA引物Pol?/引發酶有依賴DNA的ATPase活性，結合於引物-範本鏈，啟動DNA聚合酶，促使PCNA結合於引物-範本鏈RFC啟動DNA聚合酶和RFC的ATPase活性PCNA單鏈DNA結合蛋白，啟動DNA聚合酶，使解旋酶容易結合DNARPA功能蛋白質真核DNA複製叉主要蛋白質的功能DNA-polδ和polα分別兼有解螺旋酶和引物酶活性。在複製叉及引物生成後，DNA-polδ通過PCNA的協同作用，逐步取代polα，在RNA引物的3?-OH基礎上連續合成領頭鏈。隨從鏈引物也由polα催化合成。然後由PCNA協同，polδ置換polα，繼續合成DNA子鏈。二、真核生物複製的延長發生DNA聚合酶α/δ轉換真核生物和原核生物DNA聚合酶的比較E.Coli真核細胞功能Ⅰ填補複製中的DNA空隙，DNA修復和重組Ⅱ複製中的校對，DNA修復?DNA修復?線粒體DNA合成Ⅲ?前導鏈合成DnaG?引物酶?後隨鏈合成真核生物的DNA聚合酶二、DNA聚合酶的堿基選擇和校對功能實現複製的保真性複製按照堿基配對規律進行，是遺傳資訊能準確傳代的基本原理。此外還需酶學的機制來保證複製的保真性。遵守嚴格的堿基配對規律；聚合酶在複製延長時對堿基的選擇功能；複製出錯時有即時校對功能。DNA複製的保真性至少要依賴三種機制：（一）複製的保真性依賴正確的堿基選擇利用“錯配”實驗發現，DNApolⅢ對核苷酸的參入（incorporation）具有選擇功能。DNApolⅢ對嘌呤的不同構型表現不同親和力，因此實現其選擇功能。（二）聚合酶中的核酸外切酶活性在複製中辨認切除錯配堿基並加以校正核酸外切酶(exonuclease)是指能從核酸鏈的末端把核苷酸依次水解出來的酶，外切酶是有方向性的。A：DNA-pol的外切酶活性切除錯配堿基；並用其聚合活性摻入正確