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2025年PCR技术在微生物检测中的应用试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.2025年某实验室采用数字PCR（dPCR）检测食品中金黄色葡萄球菌，与传统实时荧光定量PCR（qPCR）相比，其核心优势在于：

A.检测速度更快

B.无需标准曲线即可绝对定量

C.对抑制物耐受性更强

D.可同时检测更多靶标

2.在多重PCR检测环境样本中的致病性大肠杆菌（EPEC、EHEC、ETEC）时，为避免引物间相互作用导致非特异性扩增，关键技术措施是：

A.提高退火温度至72℃

B.优化引物浓度比例并进行交叉配对验证

C.使用热启动Taq酶

D.延长延伸时间至90秒

3.针对临床痰液样本中结核分枝杆菌的检测，需先进行痰液消化处理（如NaOH-N-乙酰-L-半胱氨酸法），其主要目的是：

A.灭活杂菌

B.破坏痰液中的黏液蛋白以释放核酸

C.降低样本pH值提高提取效率

D.去除PCR抑制物（如多糖、血红蛋白）

4.某实验室使用逆转录PCR（RT-PCR）检测RNA病毒（如诺如病毒）时，若扩增结果出现“NTC（无模板对照）阳性”，最可能的原因是：

A.逆转录酶活性不足

B.样本RNA降解

C.引物设计跨外显子

D.扩增产物污染（气溶胶污染）

5.2025年新型微流控芯片PCR技术在环境微生物检测中的突出优势是：

A.实现单分子水平检测

B.大幅降低试剂消耗并提高通量

C.无需核酸提取步骤

D.可直接检测未培养微生物

6.在乳制品中阪崎克罗诺杆菌的PCR检测中，若样本核酸提取后OD260/OD280比值为1.2（正常范围1.8-2.0），最可能的影响是：

A.扩增效率降低（抑制物残留）

B.核酸浓度计算偏高

C.引物二聚体增多

D.熔解曲线峰型异常

7.以下哪种PCR技术可实现对微生物群落中低丰度物种（占比＜0.1%）的特异性检测？

A.常规PCR

B.巢式PCR

C.降落PCR

D.梯度PCR

8.2025年某企业开发的“微生物快速检测试剂盒”采用双重荧光标记（FAM和HEX），其设计目的是：

A.同时检测靶基因和内参基因

B.提高检测灵敏度

C.区分不同扩增阶段

D.减少非特异性扩增

9.针对土壤样本中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检测，需在PCR体系中添加BSA（牛血清白蛋白），主要作用是：

A.稳定Taq酶活性

B.中和土壤中的腐殖酸等抑制物

C.提高引物退火效率

D.促进核酸变性

10.以下关于PCR产物电泳验证的描述，错误的是：

A.需同时设置阳性对照和阴性对照

B.目标条带大小应与理论值一致（±5%）

C.若阴性对照出现条带，可能为引物二聚体

D.凝胶浓度需根据目标片段长度调整（如100bp片段用2%琼脂糖）

二、填空题（每空1分，共20分）

1.实时荧光定量PCR（qPCR）的定量依据是________，其关键参数Ct值的定义是________。

2.数字PCR（dPCR）通过________将样本分割为数万个微反应单元，每个单元内的核酸分子呈________分布（泊松分布/正态分布），最终通过________计算原始浓度。

3.多重PCR引物设计需满足的核心要求包括：________（至少2点）；为避免引物二聚体，可通过________（技术手段）验证引物对间的兼容性。

4.临床样本（如血液）中常见的PCR抑制物有________（至少2种），常用的去除方法包括________（至少2种）。

5.2025年新型“等温PCR”技术（如LAMP）与传统PCR的主要区别是________；其在基层实验室的应用优势是________（至少2点）。

6.在食品微生物检测中，PCR方法需与传统培养法进行方法学验证，验证指标包括________（至少3项）。

7.扩增曲线的三个阶段依次为________、________、________。

三、简答题（每题8分，共40分）

1.简述2025年数字PCR（dPCR）在微生物定量检测中的技术突破及应用场景。

2.分析多重PCR检测环境水样中多种致病菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌）时，可能出现“假阴性”的原因及解决措施。

3.对比传统PCR与微流控芯片PCR在微生物检测中的性能差异，说明微流控技术对基层检测的意义。

4.某实验室使用qPCR检测痰液中的结核分枝杆菌，连续3次实验出现“样本Ct值偏高但阳性对照