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2025年pcr检测上岗证考试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，60分）

1.以下关于PCR引物设计的基本原则，错误的是（）

A.引物长度通常为18-25个核苷酸

B.引物GC含量应控制在40%-60%

C.引物3’端避免连续3个G/C碱基

D.引物5’端必须与模板严格互补

答案：D（解析：引物5’端可添加酶切位点或标签，无需严格互补）

2.实时荧光PCR扩增曲线的“指数期”主要用于（）

A.确定基线范围

B.计算Ct值

C.判断扩增效率

D.识别非特异性扩增

答案：B（解析：Ct值定义为荧光信号达到阈值时的扩增循环数，通常在指数期读取）

3.以下哪种物质对TaqDNA聚合酶抑制作用最强？（）

A.肝素

B.EDTA

C.血红蛋白

D.尿素

答案：A（解析：肝素通过与Taq酶结合直接抑制活性，是PCR最常见的抑制物之一）

4.临床PCR实验室“三区两通道”中，“三区”指的是（）

A.试剂准备区、样本处理区、扩增分析区

B.样本接收区、核酸提取区、扩增区

C.试剂储存区、扩增区、产物分析区

D.清洁区、半污染区、污染区

答案：A（解析：根据《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》，标准分区为试剂准备区、样本处理区、扩增分析区）

5.进行RNA病毒PCR检测时，若使用一步法RT-PCR，关键操作是（）

A.增加Taq酶用量

B.优化逆转录温度和时间

C.减少dNTP浓度

D.延长变性时间

答案：B（解析：一步法RT-PCR中，逆转录效率直接影响最终扩增结果，需根据引物Tm值优化反应条件）

6.以下关于荧光探针法（TaqMan）的描述，正确的是（）

A.荧光信号强度与探针水解量成反比

B.探针5’端标记淬灭基团，3’端标记报告基团

C.适用于多重PCR检测

D.对引物设计要求低于染料法

答案：C（解析：TaqMan探针可通过不同荧光标记实现多重检测；A应为正比，B标记位置相反，D探针法对引物和探针设计要求更高）

7.PCR实验室空气消毒首选方法是（）

A.紫外线照射（波长254nm）

B.75%乙醇喷雾

C.过氧乙酸熏蒸

D.甲醛熏蒸

答案：A（解析：紫外线对DNA/RNA有强破坏作用，是实验室空气消毒的标准方法；其他方法因残留或毒性限制使用）

8.检测样本为全血时，核酸提取前需先进行红细胞裂解，主要目的是（）

A.减少血红蛋白对PCR的抑制

B.提高白细胞得率

C.避免红细胞DNA干扰

D.降低样本黏稠度

答案：A（解析：血红蛋白中的铁离子可螯合Mg2+，抑制Taq酶活性，需优先去除）

9.某批次PCR试剂扩增阴性对照出现弱阳性，最可能的原因是（）

A.引物二聚体

B.试剂被扩增产物污染

C.样本交叉污染

D.仪器温度偏差

答案：B（解析：阴性对照阳性提示试剂或操作过程中引入外源性DNA污染，最常见为前批次产物污染）

10.以下Ct值判读规则中，符合《临床基因扩增检验实验室工作规范》的是（）

A.Ct≤35为阳性，35Ct≤40为灰区，Ct40为阴性

B.Ct≤30为阳性，30Ct≤35为灰区，Ct35为阴性

C.所有Ct值均需结合熔解曲线分析

D.灰区样本需重复检测，重复后Ct值仍在灰区则判阴性

答案：A（解析：根据规范，通常以Ct≤35为阳性，35-40需结合样本类型重复验证，40为阴性）

11.进行定量PCR时，标准曲线的R2值应至少达到（）

A.0.90

B.0.95

C.0.98

D.1.00

答案：C（解析：定量PCR要求标准曲线相关系数R2≥0.98，以保证定量准确性）

12.以下哪种物质可用于PCR产物的灭活处理？（）

A.10%次氯酸钠

B.无水乙醇

C.生理盐水

D.去离子水

答案：A（解析：次氯酸钠通过氧化破坏核酸结构，是PCR产物灭活的常用试剂）

13.实时荧光PCR仪的温度均匀性要求是（）

A.各孔间温差≤0.5℃

B.各孔间温差≤1.0℃

C.各孔间温差≤1.5℃

D.各孔间温差≤2.0℃

答案：A（解析：温度均匀性直接影响扩增效率，规范要求各孔间温差≤0.5℃）

14.核酸提取过程中，加入RNase抑制剂的主要目的是（）

A.防止DNA降解

B.抑制样本中的RNA酶

C.提高核酸纯度

D.促进核