酵母的提取及组分鉴定.pptVIP

酵母的提取及组分鉴定第1页，共6页，星期日，2025年，2月5日一、目的与要求了解RNA提取的原理，掌握RNA组分鉴定的方法第2页，共6页，星期日，2025年，2月5日二、实验原理酵母细胞中所含的核酸主要是RNA,DNA含量很少，故本实验采用酵母提取RNA。由于酵母细胞中所含的核蛋白不溶于水和稀酸，但能溶于稀碱，所以先用稀碱加热煮沸处理，使RNA成为可溶性的钠盐而与酵母中其它的成分分离。然后加乙醇沉淀溶液中的RNA，最后加酸将其完全水解，并用下列方法鉴定其中组分：(一)钼酸铵试剂与无机磷酸结合生成的磷钼酸易被还原生成钼蓝，以鉴定核酸中的磷。(二)3,5-二羟基甲苯与核糖在浓酸中共热呈绿色，以鉴定核糖的存在。(三)嘌呤碱与硝酸银共热产生褐色的嘌呤银沉淀，以鉴定嘌呤的存在。第3页，共6页，星期日，2025年，2月5日三、操作步骤(一)酵母中RNA的制备1.取0.5g干酵母置研钵中，加入0.04mol/LNaOH4ml，磨3～5min，使其成匀浆；2.将酵母匀浆倒入1支大试管中，在沸水中加热30min；3.把大试管中匀浆分别放入2支小试管中，配平；4.2000r/min离心15min，将两上清液分别倒入另两小试管中，弃去沉淀；5.各加3mol/LHAc2滴，立即摇匀酸化，用石蕊试纸检查。6.上述溶液猛力摇匀后，徐徐倒入两支各盛有2.5ml酸性乙醇的试管中，即有白色沉淀析出。7.2000r/min离心15min，倾去上清液，作下一步实验。第4页，共6页，星期日，2025年，2月5日(二)RNA的水解两管沉淀物中各加入1.5mol/LH2SO42.5ml后合并，沸水浴10min，使其充分水解。(三)RNA组分鉴定（取试管3支编号）1.磷酸试验：1号管，取钼酸铵试剂10滴，加RNA水解液10滴摇匀，再加4%维生素C6滴混匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变化。2.核糖试验：2号管，取3,5-二羟基甲苯试剂6滴，加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热5～10min，观察颜色变化。3.嘌呤试验：3号管，取5%AgNO310滴，加氨水2-3滴（至沉淀消散后），再加RNA水解液10滴摇匀后，置沸水浴中加热约5～10min，观察颜色变化。第5页，共6页，星期日，2025年，2月5日四、结果与计算管号1号2号3号颜色五、注意事项(一)酵母研磨要充分；(二)沸水中加热时要时常摇动试管；(三)硝酸银中加氨水应逐滴加入，白色沉淀消散后再加水解液。???第6页，共6页，星期日，2025年，2月5日**