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单核苷酸多态性核酸试纸条检测技术的建立

一、技术原理与核心优势

（一）单核苷酸多态性（SNP）检测技术原理

单核苷酸多态性（SNP），作为基因组水平上由单个核苷酸变异引发的DNA序列多态性，在人类遗传变异中极为常见，平均每500-1000个碱基对中便有1个，总数估计可达300万个甚至更多。基于核酸横向流试纸条的SNP检测技术，能够精准识别这些微小的遗传差异。

该技术的核心在于通过精心设计特异性探针，来识别目标位点的核苷酸变异。具体而言，首先利用聚合酶链式反应（PCR）对包含SNP的靶标区域进行扩增，使微量的目标核酸得以大量复制，便于后续检测。随后，结合单碱基延伸或连接反应，进一步区分不同的等位基因。在单碱基延伸反应中，引物会在SNP位点处仅延伸一个碱基，而连接反应则是将特定的寡核苷酸连接到与SNP位点互补的序列上，通过这些反应，不同的等位基因会产生不同的产物。

最后，利用纳米金标记探针，这些标记有纳米金的探针会与经过上述反应的产物结合，当它们在试纸条上移动时，会与硝酸纤维素膜上预先固定的捕获探针（检测线与质控线）发生特异性结合。检测线上的捕获探针针对目标SNP位点的特定等位基因，而质控线则用于验证检测过程是否正常进行。如果样本中存在目标SNP，纳米金标记的探针-产物复合物就会被捕获在检测线上，形成肉眼可见的显色条带，从而实现SNP位点的可视化检测。这种技术将分子生物学反应与横向流层析技术有机整合，使得检测过程高效且直观。

（二）与传统方法对比的技术优势

在SNP检测领域，传统技术如基因芯片和高通量测序占据着重要地位。基因芯片技术通过将大量已知序列的核酸探针集成在固相载体上，与标记的样品分子杂交来检测基因表达或变异情况，具有高通量、可同时检测多个基因的优势。高通量测序技术则能够对DNA或RNA分子进行大规模测序，提供全面的序列信息，在基因组学研究中发挥着关键作用。

然而，核酸试纸条检测技术与这些传统方法相比，具有显著的独特优势。在操作方面，核酸试纸条检测无需复杂的仪器设备，只需简单的样本处理和加样操作，基层医疗单位的工作人员或现场检测人员经过简单培训即可掌握，大大降低了检测的技术门槛。与之对比，基因芯片需要昂贵的芯片阅读仪等设备，高通量测序更是依赖大型的测序仪和专业的生物信息分析平台，操作复杂且对技术人员要求高。

成本上，核酸试纸条的材料成本较低，且无需高昂的仪器购置和维护费用，适合大规模筛查使用。基因芯片的制备和检测成本较高，高通量测序不仅设备昂贵，测序试剂和数据分析成本也居高不下。

检测速度也是核酸试纸条的一大亮点，通常能在30-60分钟内完成检测，快速得出结果，这对于需要即时诊断的场景，如疫情现场筛查、急诊诊断等尤为重要。传统的基因芯片和高通量测序检测流程繁琐，从样本处理到获得结果往往需要数小时甚至数天。

结果判读上，核酸试纸条通过肉眼观察显色条带即可判断结果，简单直观。而基因芯片和高通量测序的结果需要专业的软件和人员进行数据分析和解读，结果的理解和应用相对复杂。

在特异性和灵敏度方面，核酸试纸条检测技术通过精心设计探针序列和优化反应条件，同样能够达到单核苷酸水平的差异识别，确保了检测的准确性，可与传统技术相媲美。

二、检测技术建立的关键步骤

（一）核酸试纸条的构建与关键组件设计

核酸试纸条的构建是实现SNP准确检测的基础，其结构设计和组件选择至关重要。本技术采用多层复合结构的核酸试纸条，各层分工明确，协同实现样本检测与结果呈现。

试纸条的浸入区位于样本加载端，采用玻璃纤维材质。玻璃纤维具有良好的亲水性和毛细管效应，能够迅速吸收样本液体，并将其均匀地传递到后续区域，确保样本中的核酸物质能够顺利进入检测流程。当含有核酸样本的液体滴加到浸入区时，玻璃纤维就像一块高效的海绵，快速吸附并引导液体流动。

结合区由聚酯纤维构成，主要负载纳米金标记探针。纳米金具有独特的光学性质和生物相容性，能够与核酸探针稳定结合。在这个区域，纳米金标记探针与样本中的核酸在适宜的条件下发生特异性杂交反应。由于纳米金的存在，杂交后的复合物在后续的检测过程中能够产生明显的可视化信号，大大提高了检测的灵敏度和直观性。例如，当样本中存在目标SNP时，纳米金标记探针会与含有该SNP的核酸片段特异性结合，形成稳定的复合物。

反应区是试纸条的核心区域，由硝酸纤维素膜组成。在硝酸纤维素膜上，精心包被了特异性捕获探针与质控探针。其中，检测线包被的是针对目标SNP位点的特异性捕获探针，如ZW-T、ZM-T探针。这些探针的序列经过精心设计，含有通用尾巴，便于固定在硝酸纤维素膜上。它们能够与纳米金标记探针-核酸复合物中的目标核酸序列发生特异性杂交，从而