第四章 反相微胶团萃取技术.pptVIP

第29页，共53页，星期日，2025年，2月5日3.表面活性剂类型的影响表面活性剂选用原则：1）有利于增强蛋白质表面电荷与反胶束内表面电荷间的静电作用和增加反胶束大小的表面活性剂。2）还应考虑形成反胶束及使反胶束变大(由于蛋白质的进入)所需的能量的大小、反胶束内表面的电荷密度等因素，这些都会对萃取产生影响。目前研究中常用的AOT反胶束体系和其他体系有许多不足，如不能用于分子量较大的蛋白质的萃取和往往在两相界面上形成不溶性的膜状物等等，为克服这些不足,可通过在单一表面活性剂中加入具有亲和作用的生物表面活性剂或另一种非离子型表面活性剂的方法来改善萃取性能。第30页，共53页，星期日，2025年，2月5日4.表面活性剂浓度的影响增大表面活性剂的浓度可增加反胶束的数量，从而增大对蛋白质的溶解能力。但表面活性剂浓度过高时，有可能在溶液中形成比较复杂的聚集体，同时会增加反萃取过程的难度。因此，应选择蛋白质萃取率最大时的表面活性剂浓度为最佳浓度。总结反胶束体系对核糖核酸酶a与伴刀豆球蛋白进行萃取的结果，得到了分配系数K同表面活性剂浓度[S]以及pH值的关系式：1nK＝A十B*pH十(C十D*pH)ln[S]式中系数A、B、C、D取决于蛋白质的性质，可通过实验测定。第31页，共53页，星期日，2025年，2月5日5.离子种类对萃取的影响阳离子的种类对萃取率的影响主要体现在改变反胶束内表面的电荷密度上。通常反胶束中表面活性剂的极性基团不是完全电离的，有很大一部分阳离子仍在胶团的内表面上(相反离子缔合)。极性基团的电离程度愈大，反胶束内表面的电荷密度愈大，产生的反胶束也愈大。6.影响反胶束结构的其他因素1）有机溶剂的影响:有机溶剂的种类影响反胶束的大小，从而影响水增溶的能力，所以可以利用因溶剂作用引起的不同胶束结构实现选择性增溶生物分子的目的，如α-胰凝乳蛋白酶随溶剂的不同在反胶束中增溶的比率会出现显著的差别。第32页，共53页，星期日，2025年，2月5日2）助表面活性剂的影响:当使用阳离子表面活性剂时，引入助表面活性剂，能够增进有机相的溶解容量，这多半是由于胶束尺寸增加而产生的。3）温度的影响:温度的变化对反胶束系统中的物理化学性质有激烈的影响，增加温度能够增加蛋白质在有机相的溶解度，例如增加温度可使α-胰凝乳蛋白酶进入NH4-氯仿相并在转移率上分别增加50％。4）蛋白质分子量的影响：当蛋白质分子量大于30000时，最大萃取率低于60%，萃取效果明显下降。因此，如何使反相微胶团变得足够大，使其能包裹住蛋白质，是反相微胶团萃取中需要解决的一个重要课题。第33页，共53页，星期日，2025年，2月5日四、反胶束萃取技术在食品科学上的研究1酶学研究中的应用在生物催化体系中，酶的活性与稳定性是实现酶催化反应并获得高产率生成物的重要条件。酶的活性与稳定性受到诸如底物种类、底物浓度、酶浓度、pH、温度、金属离子、缓冲液种类以及浓度等因素的影响。影响的结果可使酶活力大幅度升高或失去活性。这是酶的本质与作用特点所决定的。利用反胶束就可以解决这个问题，反胶束体系是光学透明的热力学稳定的体系，可以很好地模拟酶的天然环境，并有利于用光学方法如圆二色柱、荧光发散、紫外色谱跟踪酶反应进程。因此，很多科学家以反胶束体系来模拟生物膜酶的作用机理及构象变化，导致反胶束体系中酶系统的应用越来越广。第34页，共53页，星期日，2025年，2月5日已报道有50多种酶的反胶束体系中具催化活性。反胶束体系中核心水团分为自由水和结合水。W0较小时，核心水团主要是结合水；随W0增大，自由水逐渐增加。核心环境逐渐接近水溶液。酶分子与表面活性剂间作用取决于酶分子与反胶束性质，酶活性主要取决于核心水团大小，表面活性剂性质，反胶束浓度。Karpe等用AOT/异辛烷体系研究了α-凝乳蛋白酶的超活性，认为酶超活性是由于：①“水池”中底物浓度高于水相中底物浓度；②带负电的底物与带负电的表面活性剂表面产生斥力作用于酶，使酶活性增大。第35页，共53页，星期日，2025年，2月5日辅酶再生：氧化还原酶催化反应中，辅酶再生是决定反应过程经济性的关键因素。PileniM等研究反胶束体系中辅酶NADH的再生。氢的氧化与脂酰氨酶催化NAD+还原结合，再生的NADH辅酶可以被氧化还原酶利用。第36页，共53页，星期日，2025年，2月5日2在油脂的水解和合成中的应用众所周知,脂肪酶能催化具有工业价值的反应，如低级、高级脂肪间的转化，但脂肪酶仅能催化油水界面上的脂肪分子，对纯样脂肪体系无能为力。据此，科学家们想出了一种新的方法，就是以反胶束体系作为反应介质，效果也比较理想。目前食品工业研究较多的是脂肪