抑制miR-21成熟的环肽设计与结构解析.pdfVIP

哈尔滨工业大学理学硕士学位论文

摘要

miR-21是一种致癌miRNA，在大多数肿瘤中都过度表达，是目前研究最多

的致癌miRNA之一。miR-21基因转录出的初级miRNA（pri-miRNA）经两步加

工才能生成有活性的miR-21，阻止miR-21成熟对肿瘤的抑制起重要作用。pri-

miRNA首先经Drosha酶切割产生前体（pre-miRNA）茎环，再经Dicer酶切割产

生有功能的成熟miRNA。本研究拟设计一种环肽与miR-21前体结合，从而与

Dicer酶竞争结合位点来抑制其成熟，降低miR-21在相应肿瘤细胞中的表达，达

到干预癌症进程的目的。

本研究以miR-21为目标，设计了抑制miR-21成熟的环肽，并对其结构进行

了初步分析。首先设计得到能够代表pre-miRNA顶端环结构、并包含Dicer底物

位点的截短体，并通过T7RNA聚合酶体外转录、Q-Sepharose阴离子交换柱纯化、

核磁共振鉴定其结构。结果显示，pre-miR-21截短体具有与全长RNA一致的二级

结构，折叠状态良好。其次，以环肽L22为基础，探索了环肽中利用天然转角代

替转角的可能性，并在此基础上改造已知结合环肽L50。最后，用电泳迁移实验

和核磁滴定实验确定了其与pre-miR-21截短体的亲和力和相互作用位点，并解析

了新环肽的溶液结构。结果显示新环肽的β-发卡结构更稳定，对称度更高，预示

其与miR-21前体有更特异的结合能力。

该项目主要实现了以下两点：替换原靶向pre-miR-21中促进β转角形成的模

板D-Pro-L-Pro，引入来自天然β-转角的肿瘤靶向序列NGR，并维持了环肽的β发

卡结构；增加了环肽与miR-21前体的亲和力和特异性。该工作为进一步优化靶向

调控癌基因miR-21成熟的环肽提供了研究基础。

关键词：靶向RNA药物；环肽；核磁共振；miR-21

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哈尔滨工业大学理学硕士学位论文

Abstract

miR-21isoneofthemoststudiedoncogenicmiRNAs,whichisoverexpressedin

mosttumors.TogenerateanactivemiR-21,theprimarymiRNA(pri-miRNA)transcribed

fromthemiR-21geneneedstwoprocessingsteps:Thepri-miRNAiscleavedbythe

Droshaenzymetoproduceaprecursor(pre-miRNA)stem-loopstructure,whichisthen

cleavedbytheDicerenzymetoproduceafunctionalmaturemiRNA.Theinhibitionof

miR-21maturationplaysanimportantroleinsuppressingtumors.Inthiswork,we

designedacyclicpeptidethatbindstothepre-miRNAofmiR-21,competeswithDicer

enzymebindingsite,andinhibitsitsmaturation,therebyreducingmiR-21expressionin

correspondingtumorcellsandinterveninginthecancerprocess.

WetargetedmiR-21anddesignedacyclicpeptidetoinhibititsmaturation,