非洲猪瘟病毒K196R和A240L蛋白的可溶性表达及酶活力分析.pdfVIP

生物技术通报

·研究报告·BIOTECHNOLOGYBULLETIN()

2020,3611:70-75

非洲猪瘟病毒K196R和A240L蛋白的可溶性表达及酶

活力分析

李鹏昊 梁严予 王彦伟 关洋 逄文强 田克恭

（国家兽用药品工程技术研究中心，洛阳471003）

摘要：旨在提供可用候选抗原蛋白，用于非洲猪瘟病毒（Africanswinefevervirus，ASFV）的诊断及免疫预防研究。将

ASFVSY18株K196R和A240L蛋白的编码基因进行密码子优化，并在其N端添加促溶标签进行融合表达；TEV酶切后利用亲和层

析纯化目的蛋白，并通过Westernblot和酶活检测试剂盒对其反应性和体外酶活力进行鉴定。结果显示，K196R和A240L蛋白分别

通过添加SUMO和MBP标签实现了可溶性表达，标签去除后蛋白大小分别为22kD和27kD左右；Westernblot结果显示，K196R

和A240L蛋白均能够与ASF阳性血清发生较好的特异性反应；酶活检测结果表明，二者均具有一定的体外酶催化活性。利用大肠

杆菌表达的ASFVK196R和A240L可溶性蛋白，具有较好的反应性和一定的体外酶催化活性，可为ASFV的诊断及蛋白的相关功

能研究提供一定的依据。

关键词：非洲猪瘟；K196R蛋白；A240L蛋白；可溶性表达；Westernblot鉴定；酶活力分析

DOI：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2020-0216

SolubleExpressionandEnzymeActivityAnalysisofAfricanSwine

FeverVirusK196RandA240LProteins

LIPeng-haoLIANGYan-yuWANGYan-weiGUANYangPANGWen-qiangTIANKe-gong

（NationalResearchCenterofVeterinaryMedicine，Luoyang471003）

Abstract:TheobjectiveofthisworkistoprovideeffectiveantigensfortheclinicaldiagnosisandimmunoprophylaxisofAfricanswine

fevervirus（ASFV）.K196RandA240LcodingsequencesderivedfromASFVSY18wereexecutedcodonoptimizationandco-expression

withsoluble-tagintheirNterminals.ThetargetproteinswerepurifiedbyaffinitychromatographyafterTEVdigestion，andtheirreactivityand

enzymaticactivitywereevaluatedthroughWesternblotandenzymeactivitydetectionkit，respectively.Asresults，thesolubleexpressions

ofK196RandA240LproteinswereobtainedbyseverallyfusingwithSUMOand