免疫电泳技术课件.pptVIP

免疫電泳技術免疫學及免疫學檢驗第一節概述免疫電泳技術實質上是直流電場作用下的凝膠擴散試驗。Grabar和Williams於1953年首先將凝膠擴散置於直流電場中進行，讓電流加速抗原和抗體的擴散，並規定其運動方向，從而使這種沉澱反應時間大縮短，敏感度顯著提高。隨著現代生物學醫學科學技術的發展，免疫電泳技術有了新的發展，應用範圍日益擴大，不僅用於人與動物血清蛋白、各組織器官抗原成分及抗體的分析，也用於細菌、植物性抗原、酶與激素的檢測。免疫學及免疫學檢驗一、電泳的原理?帶電質點在電場中向帶有異相電荷的電極移動，這種現象稱為電泳。抗體及大多數抗原是蛋白質，具有許多可解離的酸性和鹼性基團如COO—及NH3+等，在一定pH條件下，這種兩性電解質解離成為帶正電或負電的質點，其泳動方向和泳動速度與本身淨電荷量、顆粒大小、形狀等有關。所帶淨電荷量越多，顆粒越小，泳動速度越快。免疫學及免疫學檢驗二、影響因素?1.電場強度是指每釐米的電位降，以V/cm表示。電泳時，可採用恒定電流，變動電壓；也可恒定電壓，變動電流。I=V/R，恒定電壓時，因R不斷下降，所以電流增高，顆粒移動速度和熱效應也增大。通常採用電壓在2~10V/cm；當恒定電流時，由於R不斷下降，因此，V也隨之下降，從而蒸發較少，熱效應也小，移動率接近恒定。因此恒定電流要比恒定電壓好。常用電流為2~4mA/cm。免疫學及免疫學檢驗2.溶液pH值溶液pH值決定蛋白質帶電荷種類和數量。pH離等電點越遠，離子解離越多，泳動速度越快，反之則越慢。為了使電泳速度恒定，必須採用緩衝溶液。由於大多數蛋白質的等電點較低，一般電泳所採用的緩衝溶液均偏鹼性，因而使大部分的分子帶負電荷。免疫學及免疫學檢驗3.離子強度溶液的離子強越高，電導率越高，則帶電質點泳動速度越慢並有較高的熱效應；反之，離子強度低，質點泳動快，熱效應較小。免疫學及免疫學檢驗4.電滲在電場中液體相對於固體的移動稱為電滲。在瓊脂凝膠電泳中，由於瓊脂是帶負電荷的極性基團(如SO42—、COO—)，使瓊脂成為負電的固相，靜電感應作用使瓊脂網格附近的水帶正電，因此，液體向負極流動，形成電滲力。帶電質點泳動時受電泳力和電滲力的共同作用。如電泳力低於電滲力，則向負極移動。如抗體，在鹼性環境帶負電，應向正極移動，但由於其等電點較高，電荷少，抵不過電滲力而泳向負極。免疫學及免疫學檢驗第二節對流免疫電泳?對流免疫電泳(counterimmunoelectrophoresis,CIEP)又稱免疫電滲電泳(immuno-osmophoresis,IEOP)。是在直流電場中進行的免疫雙擴散技術。免疫學及免疫學檢驗(一)原理在pH8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白因等電點高，只帶有微弱的負電荷，而且分子又較大，因此電泳力小，小於電滲力，泳向負極；而一般抗原蛋白質常帶較強的負電荷，分子較小，電泳力大，大於電滲力，泳向正極，電泳時抗原放負極側，抗體放正極側，抗原抗體相對泳動，一定時間後抗原和抗體將在兩孔之間相遇，在比例適當處形成肉眼可見的沉澱線。免疫學及免疫學檢驗(二)操作步驟1.製備1.2%巴比妥瓊脂凝膠板。2.在瓊脂板上成對打孔，孔徑3mm，孔距6mm。3.於陰極側孔內加入待檢血清或陽性對照血清，陽極側孔內加抗血清。4.電泳電泳條件3~4mAcm寬，電泳30min。5.觀察結果或在室溫放置數小時後觀察沉澱線，見圖。免疫學及免疫學檢驗1為陽性2為弱陽性3/4為強陽性免疫學及免疫學檢驗(三)方法評價對流電泳簡便、快速、敏感度較雙相瓊脂擴散試驗高8~10倍，但分辨力低於雙向瓊脂擴散試驗。免疫學及免疫學檢驗第三節火箭免疫電泳?火箭免疫電泳(rocketimm