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洁净区环境测试操作规程

颁发部门：质量部

分发部门：生产部、设备部、质量部、采购部、仓储部、财务部

一、目的：建立一个空气洁净度监测标准操作规程，规范空气洁净度监测操作程序，保证细胞生产洁净车间的空气洁净度符合GMP要求。

二、范围：适用细胞生产洁净车间的空气洁净度的监控。

三、职责/依据：质量部负责该标准操作规程的制订，并监督制度的执行；质量保证部和质量控制部门负责该标准操作规程的实施；质量保证部门对进行监督与检查。

四、程序/内容：

1概述

1.1洁净厂房是指根据需要对空气的尘粒（包括微生物）、风速、温湿度及压力等进行控制的密闭环境，其建筑结构、装备及其使用均具有减少该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能，并以其空气洁净度等级符合《药品生产质量管理规范》的要求。

1.2洁净厂房分为：D级、C级，B级、A级。本公司细胞生产洁净区为D级、C级和局部A级。

2沉降菌测试

2.1方法概述

本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

2.2所用设备及仪器

高压灭菌锅：使用时严格按照操作规程使用

恒温培养箱：定期对培养箱温度进行检定

2.3培养皿：一般采用ф90mm×15mm玻璃培养皿。

2.4培养基：普通营养琼脂培养基

将培养基加热熔化，冷却至约45℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。待琼脂培养基凝固后，将培养皿放入30~35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养皿应在2~8℃的环境中存放。

2.5测试步骤

1）采样

①将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。

②静态测试时，培养皿暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿暴露时间为4小时，单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。

③全部采样结束后，将培养皿盖上盖子，倒置放置。

2）培养

①全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

②在30~35℃培养，时间不少于72h。

③每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。

3）菌落计数

①用肉眼直接计数。

②若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

2.6注意事项

1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、准确性。

2）采取一切措施防止人为对样本的污染。

3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

4）由于细菌种类繁多、差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5）采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

2.7测试规则

1）测试状态

①沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，压差必须控制在规定值内。

②沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。

③测试状态有静态和动态两种，状态的选择必须符合生产的要求，并在报告及记录中注明测试状态。

2）测试人员

①测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

②静态测试时，室内测试人员不得多于2个人。

3）测试时间

①静态测试时，洁净厂房的空气净化调节系统的风机启动30分钟后开始测试。

②动态测试，在生产人员处于正常生产状态下进行的测试。

③对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。

④对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。

4）沉降菌计数

①采样点数目及布置：采样点布置参考图1，工作区测试点位置离地0.8~1.5m左右（略高于工作面）。

②最少采样点数目，沉降菌的最少采样点数可按表1确定。

3.3监测原理：空气中悬浮粒子在光的照射下产生光散射现象，散射光的强度与粒子的体积成正比。

3.4Metone-3400型微尘粒子计数器使用要点。

1）使用仪器时应严格按照《Metone-3400型微尘粒子计数器标准操作规程》进行操作。

2）仪器开机预热至稳定后，方可按说明书的规定对仪器进行设置。

3）采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。

4）采样管必须干净，严禁渗漏。

5）采样管的长度应根据仪器的允许长度。除另有规定外，长度不得大于1.5m。

6）计数器采样口和仪器工作位置应处在同一气压和温度下，以免产生测量误差。

7）必须按照仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性。

3.5测试规则

1）测试条件

①温度和湿度：洁