2025年高中三年级生物选修三实验设计试卷（含答案）.docxVIP

2025年高中三年级生物选修三实验设计试卷（含答案）

考试时间：______分钟总分：______分姓名：______

一、

阅读以下材料，回答问题：

某种细菌能够产生一种限制性核酸内切酶，该酶能够识别并切割DNA分子中特定的碱基序列（识别位点），切割后产生的粘性末端可用于基因重组。科研人员欲利用该细菌的限制性核酸内切酶和另一种能连接DNA片段的酶（DNA连接酶）构建一个表达载体，该载体需包含目的基因、启动子、终止子等基本元件，并且能够进入大肠杆菌并稳定复制。

请根据基因工程的原理，设计一个简要的实验方案，阐述如何利用该细菌产生的限制性核酸内切酶构建此表达载体。

二、

植物组织培养技术是现代植物育种的重要手段之一。为了快速获得大量遗传背景一致的单倍体植株，科研人员常利用花药或胚珠进行离体培养。

请设计一个实验方案，以某二倍体植物的花药为材料，诱导其发育成单倍体植株。在方案中，请说明至少两种不同的培养基组合及其选择依据，并简述外植体选择、灭菌、接种以及后续培养过程中的关键操作要点和注意事项。

三、

某兴趣小组欲探究不同浓度的生长素类似物对插枝生根的影响。他们准备了生长状况相似、带叶节的枝条若干，以及不同浓度的生长素类似物溶液和相应的清水（对照组）。

请设计一个实验方案，以验证该假设。在方案中，请详细说明实验步骤，包括如何处理枝条、如何设置实验组与对照组、如何进行培养以及如何观察和记录实验结果。

四、

工业发酵是现代生物技术的重要应用领域。某工厂利用酵母菌发酵生产乙醇，发酵罐已灭菌并接入酵母菌种，培养基成分已配制完成。请设计一个简要的实验方案，以监测该发酵过程是否正常进行。

在方案中，请说明需要检测的主要生理指标、检测方法以及预期结果及其含义。

试卷答案

一、

实验方案：

1.获取目的基因和质粒：用该细菌产生的限制性核酸内切酶切割含有目的基因的DNA分子，使其产生与表达载体兼容的粘性末端。同时，用相同的限制性核酸内切酶切割表达载体质粒，也产生相应的粘性末端。

2.连接目的基因与质粒：将切割后的目的基因片段和表达载体质粒置于适宜的缓冲液中，加入DNA连接酶，在适宜的温度、pH等条件下混合反应一段时间，使目的基因片段与载体质粒通过碱基互补配对连接起来，形成重组DNA分子。

3.导入大肠杆菌：将连接好的重组DNA分子导入大肠杆菌细胞中，常用的方法是热激法或Ca2?处理法。

4.筛选转化成功的细菌：将导入重组DNA的大肠杆菌涂布在含有选择培养基的平板上培养。选择培养基通常包含抗生素（若载体上含有抗性基因）和特定的指示剂（如伊红美蓝）。转化成功并表达载体上抗性基因的细菌能够存活并在平板上形成菌落。若载体上含有报告基因（如荧光蛋白基因），可通过观察颜色或荧光筛选。

5.鉴定与纯化：从筛选出的菌落中挑取单菌落进行进一步鉴定（如PCR检测目的基因、测序验证等），最终获得含有目的基因并能在大肠杆菌中稳定复制的表达载体。

解析思路：

本题考查基因工程构建表达载体的基本流程。解析思路在于掌握基因工程的四大基本步骤：获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞、筛选转化成功的细胞。重点在于理解限制性核酸内切酶在切割目的基因和质粒，产生粘性末端以便于连接的作用；DNA连接酶在缝合DNA片段中的作用；以及如何通过选择培养基和报告基因（若有时）筛选出成功导入了重组质粒的大肠杆菌。实验方案需涵盖上述关键环节，并体现出逻辑性和操作的规范性。

二、

实验方案：

1.外植体选择与灭菌：

*选择新鲜、无病虫害、发育正常的该二倍体植物的花药，最好选择在特定时期（如单核晚期）的花药，此时花粉壁与胚乳分离，易于诱导分化。

*将挑选出的花药进行消毒，通常采用70%酒精浸泡消毒数分钟，再用无菌水冲洗数次，或使用氯化汞等消毒剂处理，最后用无菌水彻底冲洗干净，去除残留消毒剂。

2.培养基选择与配置：

*培养基一：选择以MS为基本培养基的诱导愈伤组织及分化的培养基，添加适量的细胞分裂素（如6-BA），浓度可设为0.5-2.0mg/L。依据：细胞分裂素能促进花粉细胞分裂和愈伤组织形成。

*培养基二：选择以MS或B5为基本培养基的分生组织培养基，添加适量的生长素类物质（如NAA或IAA），浓度可设为0.1-0.5mg/L，并可能添加适量细胞分裂素。依据：生长素类物质能诱导愈伤组织分化或直接诱导花粉形成胚状体，细胞分裂素可辅助调控。

*培养基中还需包含蔗糖、琼脂（固化剂）和适量微量元素及铁盐，并调节pH值至适宜范围（通常5.6-5.8）。配制好后高压蒸汽灭菌。

3.接种：在无菌操作台（或超净工作台）内，将灭菌后的花药接种到上述制备好的固体培养基上