间接免疫荧光实验.pptVIP

间接免疫荧光实验第1页，共13页，星期日，2025年，2月5日实验原理固定在载片上的灵长类肝组织和HEp-2细胞与适当稀释的待检血清反应后,如果待检血清中有ANA,就会与细胞核成分特异结合,加入FITC标记的的羊抗人IgG抗体又可与ANA结合,在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。第2页，共13页，星期日，2025年，2月5日试剂与器材1.抗原片2.荧光标记的二抗3.PBS-Tween缓冲液4.阴、阳性参考血清5.封片介质:磷酸盐缓冲甘油6.盖玻片7.器材:荧光显微镜、摇床、脱色缸、吸管、试管等第3页，共13页，星期日，2025年，2月5日生物薄片生物薄片马赛克：将包被有不同基质的生物薄片固定在一个载片反应区中，可同时检测多种抗不同组织或病原体的抗体。第4页，共13页，星期日，2025年，2月5日滴定平板技术：使实验操作标准化将标本或试剂滴加到加样板反应区上，然后把生物薄片载片盖在加样板的凹槽里，所有生物薄片均与液滴接触，反应同时开始.系统的几何结构决定了液滴的位置和高度.第5页，共13页，星期日，2025年，2月5日荧光二抗荧光素发射的荧光色激发波长（nm）发射波长（nm）异硫氰酸荧光素（FITC）绿495528荧光素及其激发波长和发射波长第6页，共13页，星期日，2025年，2月5日荧光显微镜：?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????主页产品应用价目表新产品资料库公司简介联系我们?????????间接免疫荧光法?原理?操作流程?录像?ELISA?原理?操作流程?放射免疫分析法?免疫印迹法?原理?操作流程?EUROSCAN软件?欧蒙斑点法?原理?ENA谱?操作流程?欧蒙印迹法?原理?操作流程?EUROLineScan?欧蒙组合?SANQUIN公司试剂?血型试剂?人IgG亚型?流式细胞技术?细胞因子ELISA和ELISPOT?ELISPOT分析仪?四聚体工艺?粒酶?自身免疫性疾病?抗核抗体（ANA）?抗线粒体抗体（AMA）?抗肝抗原抗体?抗粒细胞浆抗体（ANCA）?抗胃壁细胞（PCA）抗体?抗甲状腺抗原抗体?抗神经元抗原抗体?抗肌内膜/麦胶蛋白抗体?病原体血清学?抗疏螺旋体抗体?抗幽门螺杆菌抗体?抗EBV抗体?抗单纯疱疹病毒（HSV）抗体?病原体血清学马赛克?IgG/RF吸附剂?变态反应性疾病?订货信息?查询?间接免疫荧光法?ELISA?欧蒙斑点法?欧蒙印迹法?免疫印迹法?间接免疫荧光法?ELISA?欧蒙斑点法?欧蒙印迹法?免疫印迹法?RIA?单页资料?小册子?资料索取?公司简介?分销商?参考实验室?地址?行车路线?E-Mail?荧光模型判度支持载片生物薄片加样板PBS-TweenPBS-Tween甘油/PBS盖玻片?????????????????落射式荧光显微镜①不需要额外的聚光镜②可产生高对比度的暗视野③同时进行明视野、暗视野的抗原基质定位④可观察两种不同的荧光⑤可改变荧光的强度第7页，共13页，星期日，2025年，2月5日IIF操作步骤１．准备：检查加样板是否反应区亲水而周边疏水。从试剂盒中取出载片，等平衡到室温时方可打开包装。注意不要触及生物薄片。用笔编号、标记。２．稀释：用磷酸盐缓冲液1:100稀释血清。注意：阳性和阴性对照不需稀释，使用前要混匀３．加样：将加样板放在泡沫板上，按顺序分别滴加25ul稀释后的血清至加样板的反应区中，避免产生气泡。滴加完所有待测标本后才开始温育。４．第一次温育：将载片覆有生物薄片的一面朝下，盖在加样板的凹槽里，反应立即开始。确保每一个标本均与生物薄片接触，且标本间互不接触。室温温育30分钟。５．清洗：用磷酸盐缓冲液流水冲洗载片1秒钟（注意水流不要太急，不要直接对着基质冲），然后立即将其浸入装有磷酸盐缓冲液的脱色缸中浸洗5分钟。第8页，共13页，星期日，2025年，2月5日６．加样：滴加20ulFITC标记的羊抗人IgG至洁净加样板的反应区中，完全加完所有的二抗后，方可继续温育。注意：标记的IgG使用前需混匀。７．第二次温育：