茎尖脱毒原理与实践.docxVIP

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茎尖培养脱毒的原理

1.病毒在体内的分布

茎尖、根尖分生组织不含病毒粒子或病毒浓度很低。

(1)在植物体内,病毒随维管系统(筛管)转移(移动),分生组织中不存在维管系统。

(2)病毒在胞间连丝中移动速度很慢,难以追赶上活跃生长的茎尖;胞间连丝微通道口最大直径0.8~1nm,病毒粒子直径10~80nm。

(3)旺盛分裂的分生细胞,代谢速度很快,使病毒无法复制.

(4)茎尖中存在高水平内源生长素,可抑制病毒的增长.

(5)植物体内确实存在“病毒钝化系统”,分生组织应比任何其它区域都有更高的活性,因而分生组织不受侵染。

2.茎尖大小与脱毒效果

用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织(apicalmeristem)即生长点,最大直径0.1mm;也可以带1~3个叶原基的茎尖(shoottip)。

茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但是不带叶原基的过小外植体离体培养存活困难,生长缓慢,操作难度大。因为茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素,而分生组织以下的1~3个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素,故带叶原基的茎尖生长快,成苗率高。

顶芽的茎尖生长要比取自腋芽的快,成活率也高。为了减少污染,可将块茎消毒后在无菌的盆土中培养。对于田间种植的材料,也可以切取插条,在实验室的营养液中生长,有这些插条的腋芽长成的枝条比直接取自田间的枝条污染少得多。也将马铃薯块茎放置在较低温度和较强光照条件下促使萌发,取其粗壮顶芽。另外,给植株定期喷施0.1%多菌灵和0.1%链霉素的混合液消毒也十分有效。

如果供试材料存在一些较难除去的病毒,如马铃薯X病毒、S病毒、纺锤块茎病毒等,可采用热处理法和茎尖培养相结合,才能达到彻底清除病毒的目的。具体方法是在茎块放在暗处使其萌芽,伸长1~2cm时,用35℃的温度处理1~4周,然后再取茎尖培养。对极难去除的马铃薯纺锤块茎病毒,需对植株进行两次热处理。第一次进行2~14周的热处理,选取只有轻微感染的植株经茎尖培养后能完全不带病毒。有时连续温度处理特别是对培养茎尖连续高温处理会引起受处理材料的损伤,可采取40℃(4h),20℃(20h)两种温度交替处理,比单用高温处理效果更好。

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