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氨基酸的薄层层析

(Thinlayerchromatographyofaminoacids)

2cm1cm1、位置：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点。每个样品间相距约1cm。2、取样：用毛细管分别吸取氨基酸溶液，取样量为毛细管柱高5cm。3、点样：点样毛细管轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。AlaArgGlyMix轻触疾起操作步骤—点样操作步骤—展层、显色AlaArgGlyMix将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线，用热风吹干或在85℃下烘干，即可显出各层斑点。试样展开过程实验原理1.薄层层析法是色谱分析技术的一种一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）硅胶吸附薄层层析实验原理吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶硅胶：表达式为SiO2·XH2O。层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（－Si－OH），这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附.实验原理硅胶吸附薄层层析的特点：①硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。②硅醇基显较弱的酸性，因而，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。③硅胶的活化温度通常为105℃－110℃，不能过高。实验原理2.氨基酸与茚三酮的显色反应

茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。实验原理3.混合氨基酸被分离后在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值（rateofflow）来表示。层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。实验材料吸附剂：硅胶粘合剂：0.5%的羧甲基纤维素钠氨基酸的异丙醇溶液丙氨酸、精氨酸、甘氨酸展开-显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）分析样品：氨基酸混合液器材层析板、尺子、铅笔烧杯、玻棒、量筒吹风机毛细管、层析缸药匙烘箱操作步骤—薄层板的制备1、调浆称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8毫升，调成均匀的糊状。2、涂布取洁净的干燥玻璃板均匀涂层。3、干燥将玻璃板水平放置，室温下自然凉干。4、活化70℃烘干30分钟。切断电源，待玻璃板面温度下降至不烫手时取出。结果计算Rf=斑点至原点距离溶剂前缘至原点距离小心量出斑点中心至原点中心距离，再量出原点中心至溶剂前沿的距离，计算出它们的Ｒｆ值。根据Ｒｆ值，鉴定出混合样品中氨基酸的种类，并绘出层析图谱。