2025年高中生物实验专题.docVIP

第一部分分子与细胞

试验一使用高倍显微镜观测几种细胞

一、光学显微镜构造

显微

显

微

镜

二、成像原理

1.显微镜下所成像是倒立、放大虚像。

2.放大倍数:目镜和物镜两者放大倍数乘积。

注:显微镜放大倍数是指直径倍数,即长度和宽度,而不是面积。

三、操作环节

1.低倍镜:取镜和安放→对光→放置玻片→调焦→观测。

2.高倍镜:在低倍镜下确定目→移动装片,使目位于视野中央→转动转换器,换用高倍物镜→调焦(转动细准焦螺旋。视野暗,可调反光镜或光圈)。

四、显微镜使用注意事项

1.镜检观测措施:姿势要端正,一般用左眼观测,右眼便于绘图或记录。

2.选择光源

(1)凡检查染色标本时,光线应强;检查未染色标本时,光线不适宜太强。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调整光线。

(2)观测透明标本时,一般视野要暗,以增大明暗反差。观测透光不佳标本时,视野要亮。

3.进行视野中细胞数目有关计算时,若视野中细胞成单行,则计算时只考虑长度或宽度;若视野中充斥细胞,计算时应考虑面积变化。

4.先低后高:先低倍镜后高倍镜;先放低镜筒,再向上调整(换高倍镜后只能用细准焦螺旋)。

5.成像规律:显微镜下所成像是上下、左右颠倒虚像,因此,物像移动方向与玻片标本移动方向相反(偏哪移哪)。

6.污物位置迅速确认措施

移动装片移动装片

移动

装片

4.高倍镜与低倍镜比较:

物像

大小

看到细

胞数目

视野

亮度

物镜与

载玻

片距离

视野

范围

高倍镜

大

少

暗

近

小

低倍镜

小

多

亮

远

大

试验二检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质

一、试验原理

某些化学试剂能使生物组织中有关有机化合物产生特定颜色反应。

1.糖类

(1)还原糖(葡萄糖、果糖、麦芽糖):还原糖+斐林试剂砖红色沉淀

(2)淀粉+碘→蓝色

2.脂肪可被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色(或被苏丹Ⅳ染液染成红色)。

3.蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应(蛋白质分子中具有诸多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中Cu2+作用,产生紫色反应)。

二、措施环节

1.糖类鉴定

操作措施

试验规定

解释

(1)制备组织样液(去皮、切块、研磨、过滤)

苹果或梨组织液必须临时制备

因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生颜色掩盖

续表

操作措施

试验规定

解释

(2)取1支试管,向试管内注入2mL组织样液

—

—

(3)向试管内注入1mL新制斐林试剂,振荡

应将构成斐林试剂甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂;切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测

斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保留时,生成Cu(OH)2在70~90℃下分解成黑色CuO和水;甲、乙液分别加入时也许会与组织样液发生反应,无Cu(OH)2生成

(4)试管放在盛有50~65℃温水大烧杯中,加热约2min,观测到溶液颜色:浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)

最佳用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不要朝向试验者

防止试管内溶液冲出试管,导致烫伤

淀粉检测和观测:用试管取2mL待测组织样液,向试管内滴加2滴碘液,观测颜色变化

碘液不要滴太多

以免影响颜色观测

2.脂肪鉴定

操作措施

试验规定

解释

(1)花生种子浸泡、去皮、切下某些子叶薄片,将薄片放在载玻片水滴中

干种子要浸泡3~4h,新花生浸泡时间可缩短

若浸泡时间短,不易切片;浸泡时间过长,组织较软,切下薄片不易成形。切片要尽量薄些,便于观测

(2)在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液,染色3min

染色时间不适宜过长

—

(3)用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精

—

不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴观测

(4)滴上1~2滴蒸馏水,盖上盖玻片

—

滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡

(5)低倍镜下寻找已着色颗粒,再用高倍镜观测,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒

装片不适宜久放

时间较长,油滴会溶解在乙醇中

3.蛋白质鉴定

操作措施

试验规定

解释

(1)制备组织样液(浸泡、去皮研磨、过滤)

—

黄豆浸泡1至2d,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节省试验时间

(2)鉴定

加样液约

2mL于试管中,加入双缩脲试剂A液,摇匀;再加入双缩脲试剂B液3~4滴,摇匀,溶液变紫色

A液和B液也要分开配制,储存;鉴定期先加A液后加B液;

CuSO4溶液不能多加

先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一种碱性环境;A、B液混装或同步加入,会导致Cu2+变成Cu(OH)2沉淀,而失效;

否则CuSO4蓝色会遮盖反应真实颜色

注:可用蛋清替代豆浆

蛋清要先稀释

假如稀释不够,在试验中蛋清与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应