第15章核酸的研究方法.pptVIP

第15章

核酸的研究方法;制备天然核酸必需采用温和的条件，防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止核酸酶的作用

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真核DNA以核蛋白（DNP）形式存在，DNP溶于水或高盐溶液（1mol/LNaCl），但不溶于低盐溶液（0.14mol/LNaCl

去除蛋白质：水饱和酚，氯仿异戊醇。

DNA沉淀：0.3MNaAC-70%乙醇;制备RNA时，最重要的是使RNase灭活：

①所有容器都要经过高温处理，不能高温高压的用0.1％焦碳酸二乙酯（DEPC）处理。

②加入强变性剂（如胍盐）使RNase失活；

③在RNA的反应体系内加入RNase的抑制剂（如RNasin);（三）核酸含量的测定;纯DNA比值1.8，＜1.8Pr、苯酚污染

纯RNA比值2.0，2.0DNA、Pr、苯酚污染

;二、核酸的沉降特性与超速离心;8MCsCl，45000rpm，16h

密度梯度：1.80g/ml→1.55g/ml

平衡时：浮力密度=CsCl密度=离心力

ρ=ρ0+4.2ω2（r2-r02）×10-10

ρ：浮力密度

ω：角速度（弧度/秒）

r：样品到转轴的距离;G-C含量与DNA的浮力密度之间呈正比关系

ρ=0.1xG-C+1.658

xG-C=（ρ-1.658）×10

;RNA＞DNA

变性DNA＞双链DNA＞蛋白质，

变