实验1-大肠杆菌的培养与分离2016.pptVIP

实验1大肠杆菌的培养与分离;实验目的:;特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.;(二)细菌;细菌的类型;大肠杆菌属于杆状菌;根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。

自养菌:

异养菌:

腐生菌

寄生菌大部分病原菌

;细菌的革兰氏染色;3.培养基的类型;选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞.使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.

;单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。

菌落是鉴定菌种的重要依据。;液体培养基：;二、无菌技术;（１）消毒定义：;a.煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min

b.巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min

c.化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源；高锰酸钾溶液；次氯酸钠溶液等

……;a、灼烧灭菌;b、干热灭菌：

160-170℃下加热1-2h。

c、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15min.;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;二、大肠杆菌的培养和分离实验操作;（二）倒平板;注意事项：

1.培养基灭菌后，需要冷却到60℃左右时，才能用来倒平板

2.灭菌及消毒：无菌超净台用紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒

3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.

4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌

5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.

;（三）大肠杆菌的扩大培养;1、划线分离法

在无菌操作台上用接种环取菌种后在固体培养基的平板上连续划线.;;不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。;;;注意事项:

1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基的不同位置连续划线多次。每次划线前接种环都要灼烧灭菌。

2.划线首尾不能相接。

3.划线后,培养皿倒置培养12~24h;分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。;问题讨论;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;（五）大肠杆菌分离后保存;2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;;划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?;2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?;4.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?;5.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?;【课堂练习】;例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（）

A.防止杂菌污染

B.接种前菌种要进行灭菌

C.培养基和发酵设备都必须灭菌

D.灭菌必须在接种前;编号;（3）若除去成分②，加入（CH2O），该培养基可用于培养。

（4）表中营养成分共有类。

（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是。

（6）右表中各成分重量确定的原则是。

（7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分。