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《中国肿瘤整合诊治技术指南(caca)-液体活检》

液体活检作为肿瘤精准诊疗领域的重要技术突破，通过非侵入性方式获取肿瘤相关生物标志物，为肿瘤的早期发现、动态监测及个体化治疗提供了新的解决方案。《中国肿瘤整合诊治技术指南（CACA）-液体活检》（以下简称“指南”）立足我国肿瘤防治现状，结合国际前沿进展与本土临床需求，系统规范了液体活检的技术路径、应用场景及质量控制标准，旨在推动该技术在临床实践中的科学应用，助力肿瘤整合诊治体系的完善。

一、液体活检的技术原理与核心生物标志物

液体活检的本质是通过分析血液、尿液、脑脊液等体液中的肿瘤源性成分，捕捉肿瘤发生发展的分子特征。其核心生物标志物主要包括循环肿瘤DNA（ctDNA）、循环肿瘤细胞（CTC）、细胞外囊泡（如外泌体）及循环RNA（如miRNA、lncRNA）等，各类标志物在肿瘤诊疗中承担不同功能，联合检测可实现信息互补。

1.循环肿瘤DNA（ctDNA）

ctDNA是肿瘤细胞凋亡或坏死时释放到外周血中的游离DNA片段，携带肿瘤特有的基因突变、拷贝数变异、甲基化异常等分子特征。其检测基于高通量测序（NGS）、数字PCR（dPCR）等技术，可敏感识别肿瘤相关驱动基因（如EGFR、KRAS、BRAF）的变异。研究显示，晚期肿瘤患者ctDNA检出率可达80%-90%，早期患者因肿瘤负荷低，检出率约为10%-50%，但通过优化测序深度（如超深度测序）及靶向甲基化检测，可显著提升早期检测效能。例如，针对肝癌的多组学液体活检方案，通过整合ctDNA甲基化与蛋白标志物（如AFP-L3），将早期诊断灵敏度从传统血清学的60%提升至85%以上。

2.循环肿瘤细胞（CTC）

CTC是从原发灶或转移灶脱落进入血液循环的肿瘤细胞，其数量与肿瘤转移潜能、预后密切相关。检测技术包括基于物理特性（如大小、密度）的富集（如ISET技术）和基于表面标志物（如EpCAM）的免疫捕获（如CellSearch系统）。CTC的异质性分析（如上皮-间质转化表型）可提示肿瘤侵袭性，动态监测CTC数量变化（如治疗后4周内下降≥50%）与化疗响应率呈正相关。在乳腺癌中，治疗前CTC≥5个/7.5ml的患者无进展生存期较5个者缩短约3个月，提示其在预后评估中的价值。

3.细胞外囊泡（EVs）与循环RNA

外泌体作为EVs的主要亚型，可携带肿瘤来源的蛋白质、核酸（如miRNA、mRNA）及脂质成分，参与肿瘤微环境重塑与远处转移。例如，肝癌细胞分泌的外泌体miR-21可抑制免疫细胞活性，促进免疫逃逸；结直肠癌细胞外泌体中的KRAS突变mRNA可通过旁分泌激活成纤维细胞，促进转移灶形成。循环RNA（如miR-155在淋巴瘤中高表达）的检测多基于qPCR或NGS，其稳定性优于游离RNA，在微小残留病灶（MRD）监测中展现潜力。

二、液体活检的关键技术环节与标准化要求

液体活检的临床应用依赖于全流程的标准化操作，任何环节的偏差都可能导致结果误判。指南从样本采集、处理、检测到报告解读，提出了具体规范。

1.样本采集与预处理

血液是最常用的检测样本，采集需使用EDTA-K2抗凝管（避免肝素干扰PCR反应），4小时内完成离心（1600g×10min分离血浆，随后16000g×10min去除细胞碎片），血浆应分装保存于-80℃（避免反复冻融）。对于其他体液（如胸腔积液、脑脊液），需根据目标标志物特性调整采集量（如脑脊液至少5ml）与保存条件（如添加RNA酶抑制剂）。

2.核酸提取与检测技术选择

ctDNA提取需采用柱提法或磁珠法，确保回收率≥80%，片段大小集中于130-170bp（符合核小体包裹特征）。检测技术的选择需结合临床需求：dPCR适合已知位点的精确定量（如EGFRT790M突变检测），NGS（尤其是靶向测序Panel）适合多基因、多变异类型的全面筛查（如泛癌种早筛），甲基化测序（如WGBS或靶向甲基化Panel）则用于表观遗传特征分析。需注意，不同技术平台的灵敏度（如dPCR的检测限为0.01%变异丰度，NGS为0.1%-1%）与特异性（如避免非肿瘤来源DNA干扰）需在报告中明确标注。

3.质量控制与数据验证

实验室需建立内部质量控制体系，包括：①阴性对照（健康人血浆）确保无外源DNA污染；②阳性对照（已知突变丰度的标准品）验证检测线性范围；③重复实验（同一标本检测2次，变异系数≤20%）评估重复性。此外，参与室间质评（如国家卫生健康委临床检验中心的ctDNA检测室间质评项目）是保证检测结果可比性的关键。数据解读需结合肿瘤类型、分期及治疗史，例如肺癌患者EGFR19del突变提示对EGFR-TKI敏感，而KRASG12C突变则需关注Sotorasib