CN114555797A 使用新型芳香异戊二烯基转移酶生物合成大麻素前体 （新加坡国立大学）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN114555797A(43)申请公布日2022.05.27

(21)申请号202080071616.1

(22)申请日2020.10.12

(30)优先权数据

62/913,9332019.10.11US

(85)PCT国际申请进入国家阶段日

2022.04.11

(86)PCT国际申请的申请数据

PCT/SG2020/0505822020.10.12

(87)PCT国际申请的公布数据

WO2021/071437EN2021.04.15

(71)申请人新加坡国立大学

地址新加坡新加坡市下肯特岭路

(72)发明人吴珮如林杰翰姚文山

(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569专利代理师马丛

(51)Int.CI.

C12N9/10(2006.01)

C12N15/54(2006.01)

C12N1/21(2006.01)

CO7C63/06(2006.01)

权利要求书1页说明书5页序列表10页附图6页

(54)发明名称

(A)二芳酸香叶基焦磷酸

(A)

二芳酸香叶基焦磷酸大麻酚酸

(57)摘要

CN114555797A一种通过使底物和香叶基焦磷酸或焦磷酸法尼酯与NphB直系同源物接触来生产大麻素前体的方法。NphB直系同源物来自大麻以外的生物体，所述底物可以是2,4-二羟基-6-戊基苯甲酸或2,4-二羟基-6-丙基苯甲酸。本文还公开了解脂耶氏酵母的重组细胞，在其基因组中携带编码来自除大麻以外的生物体的NphB直系同源物的核酸，使得

CN114555797A

CN114555797A权利要求书1/1页

2

1.一种生产大麻素前体的方法，所述方法包括使底物和选自香叶基焦磷酸和焦磷酸法尼酯的焦磷酸盐与NphB直系同源物接触，其中所述底物是2,4-二羟基-6-戊基苯甲酸(橄榄酸)或2,4-二羟基-6-丙基苯甲酸，并且所述NphB直系同源物来自除大麻以外的生物体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述底物是橄榄酸，所述焦磷酸盐是香叶基焦磷酸，并且所述大麻素前体通过LC/MS分析确定具有359.22的质荷比和超过6.1分钟的保留时间。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述NphB直系同源物来自玫瑰色链霉菌亚种oscitans、红色链霉菌、肉桂地链霉菌、杯状曲霉、土曲霉、克拉里黄梭菌、巴西诺卡氏菌和未培养细菌esnapd16.1。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述NphB直系同源物是在解脂耶氏酵母中产生的重组酶。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述NphB直系同源物来自玫瑰色链霉菌亚种oscitans、红色链霉菌、肉桂地链霉菌、杯状曲霉、土曲霉、克拉里黄梭菌、巴西诺卡氏菌和未培养细菌esnapd16.1。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述NphB直系同源物是在解脂耶氏酵母中产生的重组酶。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述NphB直系同源物具有SEQIDNO:1-8中任一个的氨基酸序列或具有与SEQIDNO:1-8中任一个至少70%相同且具有芳族异戊二烯基转移酶活性的氨基酸序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述NphB直系同源物是在解脂耶氏酵母中产生的重组酶。

9.根据权利要求2所述的方法，其中所述NphB直系同源物具有SEQIDNO:1-8中任一个的氨基酸序列或具有与SEQIDNO:1-8中任一个至少70%相同且具有芳族异戊二烯基转移酶活性的氨基酸序列。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述NphB直系同源物是在解脂耶氏酵母中产生的重组酶。

11.一种解脂耶氏酵母的重组细胞，在所述重组细胞基因组中包含编码NphB直系同源物的核酸，其中所述NphB直系同源物来自除大麻以外的生物体，并且所述NphB直系同源物在所述重组细胞中表达。

12.根据权利要求11所述的重组细胞，其中所述NphB直系同源物来自玫瑰色链霉菌亚种oscitans、红色链霉菌、肉桂地链霉菌、杯状曲霉、土曲霉、克拉里黄梭菌、巴西诺卡氏菌和未培养细菌esnapd16.1。

13.根据权利要求11所