生物分离与纯化技术(生化工艺)第7章-色谱分离技术.pptVIP

2026/1/12第7章色谱分离技术第1节色谱技术基础第2节吸附色谱第3节离子交换色谱第4节凝胶色谱本章重点：色谱分离的基本原理色谱分类及相关概念常用色谱分离技术的基本操作

2026/1/12第1节色谱分离技术基础一、色谱技术的基本概念与基本原理概念：色谱技术是一组相关分离方法的总称，色谱柱均含有固定相和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同，经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸…），不同物质在流动相与固定相中的分配不同而迁移速率不同，从而达到分离的目的。固定相：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。流动相：与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的一相

2026/1/12色谱分离技术的特点特点：（1）纯化倍数高（2）操作规模小，放大困难（3）?终产品纯化（4）操作成本高、适用于价格昂贵的产品

2026/1/12色谱分离的基本原理任何色谱分离过程实质上都是溶质随流动相流动而迁移的过程，不同溶质在流动相和固定相中的分配比例不同，因而随流动相迁移的速度不同，从而使不同物质分离开来。

2026/1/125洗脱曲线

2026/1/126色谱柱的理论塔板：流动相与固定相平均浓度达传质平衡时的一段柱高（塔板高度）反映不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系理论塔板数的计算方法：N---理论塔板数tR---保留时间W1/2---半峰宽Wb---峰底宽度理论塔板高度：L---柱长

2026/1/12二、色谱的分类根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同的分类凝胶过滤法分配色谱法离子交换色谱分离法吸附色谱法疏水作用色谱分离法金属螯合色谱分离法共价作用色谱分离法物理吸附色谱分离法

2026/1/12二、色谱的分类根据固定相的填充形式不同的分类：柱层析法薄层层析法

2026/1/12

2026/1/12第2节吸附色谱一、吸附色谱的原理吸附色谱是以吸附剂为固定相，洗脱液为流动相的色谱分离操作。混合物中不同的物质极性不同而使得吸附剂对其吸附的强度不同，极性不同的物质在固定相（吸附剂）和流动相（洗脱剂）分布不同，所以洗脱时迁移速率不同而实现对混合物的分离。

2026/1/12第2节吸附色谱二、吸附色谱填料1.硅胶硅胶表面有大量的硅醇基团，能吸附很多水分子，加热至100℃以上可除去水，500℃以上硅醇结构被破坏，硅胶失去活性；硅胶属于极性的吸附剂，对极性大的物质吸附能力强，难洗脱；硅胶呈微弱的酸性，不适合碱性物质的分离

2026/1/12第2节吸附色谱二、吸附色谱填料2.氧化铝氧化铝有酸性、中性及碱性氧化铝分别适合在酸性、中性、碱性条件下使用。氧化铝是极性吸附剂，其活性与含水量有关，含水量大则活性低，氧化铝层析剂一般是在400℃处理一段时间失水形成的。

2026/1/12第2节吸附色谱二、吸附色谱填料3.大孔树脂大孔树脂是一类人工合成的聚合物吸附剂，分为强极性、中等极性和弱极性树脂，一般弱极性和中等极性树脂用得较多；大孔树脂特点：解吸附容易、选择性好、耐用、适用广泛。

2026/1/12第2节吸附色谱三、吸附色谱操作1.薄层吸附色谱（氧化铝和硅胶薄层层析）制版：将层析剂用乙醇调糊，用涂布机涂布于玻璃平板上，经烘干处理即可；点样：点小、加样量适中、溶剂易挥发展开：选择合适的展开剂盖上层析缸盖子显色：碘蒸气、紫外、化学试剂喷雾显色

2026/1/12第2节吸附色谱三、吸附色谱操作吸附柱色谱（硅胶）层析剂预处理：浓盐酸浸泡硅胶6～12小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶3～4次，将起进行减压抽滤，后不断加蒸馏水冲洗。在1小时之后，抽滤的水呈中性，晾干后，在110℃烘箱中活化2小时。

2026/1/12第2节吸附色谱三、吸附色谱操作吸附柱色谱（硅胶）装柱：将处理好的硅胶用适当溶剂搅拌均匀，一次性装入层析柱。（柱上端平整、均匀、严实、无气泡）平衡：用洗脱溶剂洗至基线平稳上样：洗脱：同薄层展开剂

2026/1/12第3节离子交换色谱一、离子交换概述离子交换过程的本质及选择性离子交换是离子交换剂上的反离子电离至水溶液中而溶液中其他与固定电荷带有相反电荷的离子通过静电吸引力而被吸附在固定电荷，其本质上是一个可逆化学反应（平衡反应）。不同离子交换反应平衡常数不同，因而荷点溶质分配在离子交换剂与水溶液中的比例不同

2026/1/12第3节离子交换色谱一、离子交换概述影响离子交换选择性的因素（1）离子电荷数（化合价）（2）离子水合半径（3）离子电荷强弱

2026/1/12第3节离子交换色谱二、离子交换色谱原理离子交换色谱是以离子交换剂为固定相，洗脱液为流动相的色谱分离操作