3.2 基因工程的基本操作程序（第2课时）（教学设计） 高二生物（人教版2019选择性必修3）.docxVIP

3．2基因工程的基本操作程序（第2课时）

一、教学目标：

1．阐明将目的基因导入受体细胞的方法。

2．阐明目的基因的检测与鉴定的方法。

3．利用聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片段并完成电泳鉴定。

二、教学重点和难点：

1．教学重点：

(1)农杆菌转化法、显微注射法、Ca2?处理法等导入目的基因的方法。

(2)目的基因检测与鉴定的分子水平和个体水平的方法及原理。

(3)PCR扩增及电泳鉴定DNA片段的实验操作与结果分析。

2．教学难点：

(1)农杆菌转化法的详细过程及T-DNA的作用机制。

(2)不同检测方法的原理及结果判断依据，如PCR扩增、抗原-抗体杂交等。

(3)PCR扩增及电泳鉴定实验中的操作要点和误差分析。

三、教学设计思路

本课时围绕基因工程基本操作程序中“将目的基因导入受体细胞”和“目的基因的检测与鉴定”展开，致力于让学生深入理解这两个关键环节，提升学生对基因工程整体认知水平，培养学生科学思维和实验探究能力。

四、教学过程

【新课导入】

提问引导：展示基因工程操作流程图片，提问学生基因工程基本操作程序的前两个步骤。

学生回答：请学生简述目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建相关知识。

过渡衔接：根据学生回答进行点评和补充，引出本节课将目的基因导入受体细胞及检测与鉴定的内容。

【新课学习】

1．将目的基因导入受体细胞（20分钟）

(1)导入植物细胞（8分钟）：展示花粉管通道法的示意图，讲解其操作步骤：授粉后剪去柱头，滴加含目的基因的DNA溶液，使目的基因经花粉管通道进入胚囊，受体细胞为受精卵。强调该方法是我国独创，简便经济。播放农杆菌转化法的动画，详细讲解农杆菌的特点，如能侵染双子叶和裸子植物，细胞内含有Ti质粒，其T-DNA可转移并整合到植物细胞染色体DNA上。展示农杆菌转化法的操作流程，从目的基因与Ti质粒的T-DNA拼接，到重组Ti质粒导入农杆菌，再到农杆菌侵染植物细胞，使目的基因整合到受体细胞染色体DNA上，引导学生思考农杆菌转化法中目的基因与T-DNA的关系，以及如何从含目的基因的植物细胞获得转基因植株，组织学生讨论并总结。

(2)导入动物细胞（6分钟）：讲解显微注射法是将目的基因导入动物细胞的常用方法，受体细胞通常为受精卵，原因是受精卵体积大、易操作且全能性高。展示显微注射法的操作过程图片，包括构建基因表达载体并提纯，利用显微注射将载体注入受精卵，再进行早期胚胎培养和胚胎移植，最终获得具有新性状的动物。介绍病毒介导法，说明科学家用病毒DNA与目的基因构建载体感染动物细胞导入目的基因，以腺病毒载体搭载新冠病毒S基因为例，增强学生对该方法的理解。

(3)导入微生物细胞（6分钟）：讲解Ca2?处理法是导入微生物细胞的常用方法，受体细胞常选择原核细胞，如大肠杆菌，因其繁殖快、单细胞、遗传物质少、易培养。展示Ca2?处理法的操作流程，用CaCl?处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，能吸收周围环境中的DNA分子，再将重组DNA分子与感受态细胞混合，实现转化。介绍利用转基因大肠杆菌生产药物的实例，强调原核细胞生产真核生物蛋白质需体外再加工。对比植物、动物、微生物细胞导入目的基因的方法，制作表格展示常用方法、受体细胞、转化过程的差异，引导学生填写并总结规律。

2．目的基因的检测与鉴定（20分钟）

(1)分子水平检测（12分钟）：展示PCR检测转基因生物染色体DNA上是否插入目的基因的流程图，讲解提取DNA后进行PCR操作，依据DNA半保留复制原理，通过电泳判断是否扩增出目的基因。展示检测目的基因是否转录出mRNA的流程图，讲解提取mRNA后，先逆转录产生cDNA，再进行PCR扩增和检测，原理是逆转录和DNA半保留复制，也可采用PCR扩增+DNA分子杂交技术，引导学生思考两种检测方法的异同。以抗虫棉为例，展示抗原-抗体杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质的过程，讲解抗原与抗体特异性结合的原理，提取转基因植物蛋白质与相应抗体反应，观察是否出现杂交带。

(2)个体水平的鉴定（8分钟）：以抗虫棉为例，讲解通过饲喂棉铃虫观察其存活情况，判断转基因植物是否具有抗虫性及抗性程度。展示其他转基因生物的鉴定方法，如抗病毒植物进行病毒感染实验，抗盐植物用盐水浇灌，抗除草剂植物喷洒除草剂，获取目的基因产物的转基因生物进行产物功能活性比较，引导学生总结个体水平鉴定的思路和方法。

3．探究?实践——DNA片段的扩增及电泳鉴定（15分钟）

(1)实验原理（3分钟）：讲解PCR利用DNA热变性原理，通过控制温度实现DNA双链的解聚与结合，同时利用DNA半保留复制进行扩增，一次PCR一般经历30次循环。展示PCR过程中变性、复性、延伸的温度变化和分子变化示意图，帮助学生理解。

(2)材料用具（3分钟）：展示PCR仪、微量离心管、微量移液器、电泳装置等