CN120253985A 基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法及应用 （成都岷山创芯生物芯片科技有限公司）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN120253985A

(43)申请公布日2025.07.04

(21)申请号202510734697.3

(22)申请日2025.06.04

(71)申请人成都岷山创芯生物芯片科技有限公

司

地址610213四川省成都市中国(四川)自

由贸易试验区成都高新区和民街366号2号楼5层501、502号

(72)发明人瞿润连范自强代雨婷

(74)专利代理机构北京中济纬天专利代理有限公司11429

专利代理师傅剑涛

(51)Int.CI.

G01N27/26(2006.01)

G01N33/574(2006.01)

C12N15/115(2010.01)

C12Q1/6886(2018.01)

C12Q1/6844(2018.01)

C12N15/11(2006.01)

G01N27/327(2006.01)

权利要求书2页说明书10页序列表(电子公布)附图7页

(54)发明名称

基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法及应用

A基于RCA

A基于RCA的含G-四链体DNA纳米水凝胶

T4连据

CN120253985APDB铅离子特异性一步法电化学适配体传感器本发明提供了一种基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法及应用，涉及生物医学诊断分析方法技术领域，本发明基于滚环扩增(RCA)方法制备的DNA纳米水凝胶，结合G-四链体结构与Pb2+特异性识别机制构建而成，选取外泌体表面的上皮细胞黏附分子(EpCAM)作为检测靶标，利用EpCAM与其适配体之间的特异性结合引发DNA纳米水凝胶崩解，进

CN120253985A

PD

B铅离子特异性一步法电化学适配体传感器

CN120253985A权利要求书1/2页

2

1.一种基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法，其特征在于，所述方法包括基于RCA产物为基础构建DNA纳米水凝胶，所述DNA纳米水凝胶包括用于识别的核酸适配体、互补碱基杂交区域及用于信号输出的G-四链体；

基于所述核酸适配体是否与目标物特异性结合导致所述DNA纳米水凝胶崩解暴露G-四链体，以及基于所述G-四链体是否与Pb2+形成G-四链体-Pb2+复合物，通过Pb2+的电化学信号定量所述目标物，所述目标物为外泌体。

2.根据权利要求1所述基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法，其特征在于，所述Pb2+与所述G-四链体-Pb2+复合物具有明显的电化学信号差异，所述Pb2+的电子传输性能远大于所述G-四链体-Pb2+复合物。

3.根据权利要求2所述基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法，其特征在于，当上皮细胞粘附分子存在时，其与对应的所述核酸适配体结合引发所述DNA纳米水凝胶崩解，暴露出所述G-四链体并结合游离Pb2+,减少游离Pb2+的浓度，导致电化学信号强度下降；

当上皮细胞粘附分子不存在时，所述DNA纳米水凝胶保持完整，所述G-四链体未暴露，Pb2+可自由扩散至ITO电极表面，显著增强电化学信号输出。

4.根据权利要求3所述基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法，其特征在于，所述G-四链体为GTGGGTAGGGCGGGTTGG。

5.根据权利要求3所述基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法，其特征在于，DNA纳米水凝胶的引物包括Primer-1和Primer-2;

所述Primer-1为GTGGGTAGGGCGGGTTGGTGAAGGTTCGTTGTTT;

所述Primer-2为ACAGATTTTGGGAATGGTGGGTAGGGCGGGTTGG。

6.根据权利要求3所述基于DNA-Pb2+功能纳米水凝胶进行外泌体检测的均相电化学分析方法，其特征在于，DNA纳米水凝胶的挂锁包括Padlock-1和Padlock-2;

所述Padlock-1为Phosphate-CCAACCCGCCCTACCCACGTGTGATGAGACTA