d酶固定化蛋白质工程讲课文档.pptVIP

三、评价固定化酶的指标：1.固定化酶的比活：每（克）干固定化酶所具有的酶活力单位。或：单位面积（cm2）的酶活力单位表示（酶膜、酶管、酶板）。2.操作半衰期：衡量稳定性的指标。连续测活条件下固定化酶活力下降为最初活力一半所需要的时间（t1/2）第60页，共116页。三、评价固定化酶的指标：3.4.或称偶联效率，活力保留百分数。5.相对酶活力：具有相同酶蛋白（或RNA）量的固定化酶活力与游离酶活力的比值称为相对酶活力第61页，共116页。细胞固定化固定在载体上并在一定的空间范围内进行生命活动的细胞称为固定化细胞.该细胞能进行正常的生长、繁殖和新陈代谢，又称固定化活细胞或固定化增殖细胞。第62页，共116页。固定化细胞的特点类型：微生物细胞、植物细胞、动物细胞生理状态：死细胞（完整细胞、细胞碎片、细胞器）活细胞（增殖细胞、静止细胞、完整细胞）形状：颗粒状、块状、条状、薄膜状或不规则形状。最多使用：颗粒状珠体使用周期：理论上讲，固定化增殖细胞保持了细胞原有的全部活性，只要载体不解体，不污染就可以长期使用。第63页，共116页。固定化培养优点细胞可维持在较小体积培养液中生长；细胞损伤程度低；易于更换培养液；细胞和培养液易于分离；培养液中产物浓度高，简化了产品分离纯化操作。第64页，共116页。第65页，共116页。细胞固定化培养法动物细胞限制或定位于特定空间位置的培养技术谓之细胞固定化培养法。动物细胞几乎都可采用固定化方法培养。固定化方法有：吸附法（所用载体有陶瓷颗粒、玻璃珠及硅胶颗粒）包埋法（将细胞包埋于琼脂、琼脂糖、胶原及血纤维等海绵状基质中）第66页，共116页。吸附法它主要通过载体与细胞间的静电引力，即细胞表面与载体之间范德华作用力，离子键和氢键作用力，才使细胞固定在载体上的。第67页，共116页。影响吸附法的主要因素（1）Z-电位：Z-电位能近似地代表表面电荷密度的大小（2）细胞的性质和细胞壁的组成：细胞壁的电荷性质（3）载体的性质：特别是玻璃、陶瓷等无机材料第68页，共116页。包埋固定法包埋法是在细胞自身并不与凝胶基体发生化学键合的情况下将其包埋在半透性聚合物颗粒（或膜）内的一种固定化方法。包埋法的最大优点是能较好的保持细胞内多酶系统的活力，可象游离细胞那样进行产物的发酵生产。第69页，共116页。包埋法分类常用载体：琼脂、海藻酸钙、角叉菜胶、明胶、聚丙烯酰胺常用凝胶包埋法第70页，共116页。举例海藻酸钙包埋法基本原理是：称取一定量的海藻酸钠配成水溶液，经杀菌冷却后，与一定体积的细胞或孢子悬浮液混合均匀，然后用注射器或滴管将冷悬液滴入一定浓度的凝固浴中（常用CaCl2溶液），形成球状固定化细胞第71页，共116页。通过改变载体溶液参数包埋细胞改变载体溶液、操作温度、盐浓度、pH值和溶剂等参数时，亦可使其转变为凝胶状态，将细胞包埋其中。第72页，共116页。研究热点——光交联树脂包埋法例：相对分子量为1000-3000的光交联聚氨酯预聚物等，加入1%左右的光敏剂，加水配成一定浓度，加热至50℃，然后与一定浓度的细胞悬浮液混合均匀，摊成一定厚度的薄层，用紫外照射3min，就可制得第73页，共116页。固定化培养装置多层平板装置螺旋卷膜培养器多层托盘式培养器卷带式培养器中空纤维及流化床式培养器第74页，共116页。中空纤维培养器优点细胞生长密度高，可达l08个／毫升以上，细胞处于接近生理状态的理化梯度中；营养物质可有效分布，代谢废物可及时排除；细胞培养可达数月，易于实现连续培养；细胞分泌的蛋白质浓度高。产品纯度可高达60％一90％；利于降低成本；反应器体积小并可用于培养多种细胞。第75页，共116页。微载体培养方法将动物细胞吸附于微载体表面，在培养液中进行悬浮培养，使细胞在微载体表面长成单层的培养方法称为微载体培养法或微珠培养法。制备微载体的材料主要有：葡聚糖（DEAE—SephadexA50及A25）塑料明胶玻璃纤维素第76页，共116页。微载体培养优点兼具单层培养和悬浮培养的优势，且是均相培养。细胞所处环境均一，放大容易。培养操作可系统化、自动化，障低了污染发生的机会。第77页，共116页。第78页，共116页。第79页，共116页。固定化原生质体何为原生质体？有何优点？第80页，共116页。第81页，共116页。一原生质体的制备将对数