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病理切片制作技术操作规范

病理切片制作是病理学诊断的核心技术环节，其质量直接影响组织学观察和疾病诊断的准确性。规范的操作流程需涵盖从标本接收到封片归档的全环节控制，涉及组织处理、设备参数、试剂管理及人员操作等多维度要求。以下从具体操作步骤、关键控制点及常见问题处理三方面进行详细说明。

一、标本接收与前处理

1.信息核对

接收标本时需双人核对《病理标本送检单》与标本实际信息，内容包括：患者姓名、性别、年龄、病历号、送检科室、标本类型（如手术切除标本、活检标本、细胞学标本等）、数量（如“胃小弯侧组织1块，大小2.5cm×2.0cm×0.8cm”）、临床诊断及特殊要求（如需要做免疫组化或分子检测的标记区域）。核对无误后在《病理标本接收登记本》记录接收时间、接收人，并录入实验室信息管理系统（LIS）。

2.固定操作

（1）固定液选择：常规使用10%中性缓冲福尔马林（4%甲醛），需提前配制（配方：40%甲醛100mL+磷酸二氢钠4g+磷酸氢二钠6.5g+蒸馏水900mL，pH7.0±0.2）。特殊情况可选用Bouin液（适用于胚胎组织）或Zenker液（用于显示细胞颗粒），但需在送检单标注。

（2）固定液用量：固定液体积应为标本体积的5-10倍，确保组织充分浸没。若标本为空腔器官（如肠管），需用棉签轻展黏膜面并沿长轴剪开，避免皱缩；实质性器官（如肝、肾）应切成0.3-0.5cm厚的薄片，防止中心固定不全。

（3）固定时间：活检标本（≤2cm3）固定4-6小时；手术切除标本（＞2cm3）固定6-24小时；骨组织需先脱钙再固定（脱钙液常用10%硝酸，脱钙时间根据组织硬度调整，每2小时检测脱钙程度：用针尖轻刺骨组织，无阻力即完成）；神经组织需延长固定至24-48小时以保存髓鞘结构。

关键控制：固定不充分会导致组织脱水时过度收缩，影响切片完整性；固定过度（＞72小时）会使组织变硬、抗原表位破坏，影响免疫组化结果。固定过程中需避免标本与容器壁粘连，可使用纱布包裹或放置于带孔托盘中。

二、脱水与透明

1.梯度脱水

脱水剂选择分析纯乙醇，按浓度梯度依次为70%、80%、90%、95%（Ⅰ）、95%（Ⅱ）、100%（Ⅰ）、100%（Ⅱ），每级乙醇体积为标本体积的15-20倍。具体时间根据组织类型调整：

-常规组织（如胃、肠、肝）：70%（2小时）→80%（2小时）→90%（2小时）→95%（Ⅰ）（1.5小时）→95%（Ⅱ）（1.5小时）→100%（Ⅰ）（1小时）→100%（Ⅱ）（1小时）。

-脂肪组织（如乳腺、皮下组织）：70%（4小时）→80%（3小时）→90%（3小时）→后续步骤时间同常规组织（因脂肪需更长时间脱除脂质）。

-儿童组织（如淋巴结、胸腺）：每级时间缩短30%-50%（因组织疏松，脱水更快）。

2.透明处理

透明剂首选二甲苯（分析纯），分两级处理：二甲苯（Ⅰ）30分钟→二甲苯（Ⅱ）30分钟。透明终点判断：组织由白色半透明变为无色透明（脂肪组织需延长至45分钟）。若使用环保透明剂（如苯甲醇），时间需延长至1.5-2小时/级，且需增加通风避免试剂残留。

关键控制：脱水不彻底会导致透明时组织浑浊，浸蜡后出现空洞；透明过度（＞2小时/级）会使组织变脆，切片易碎裂。脱水机需每周校准温度（37±2℃），每月更换乙醇（当70%乙醇浓度＜65%时需更换）。

三、浸蜡与包埋

1.浸蜡操作

石蜡选择需根据实验室环境温度调整：夏季（25-30℃）用熔点56-58℃石蜡，冬季（15-20℃）用52-54℃石蜡。浸蜡分三级：

-石蜡（Ⅰ）：60±2℃，1小时（含真空负压-0.06MPa，加速石蜡渗透）；

-石蜡（Ⅱ）：60±2℃，1.5小时（常规浸蜡）；

-石蜡（Ⅲ）：60±2℃，1小时（备用蜡，减少杂质影响）。

骨组织、肌腱等致密组织需延长浸蜡至3-4小时/级；小标本（如穿刺组织）可缩短至0.5小时/级。

2.包埋规范

（1）包埋前准备：包埋机温度设定为65-70℃（确保石蜡流动性），包埋盒预温（避免冷盒导致石蜡凝固过快），镊子用75%乙醇擦拭后烤温（避免低温镊子导致组织周围石蜡结晶）。

（2）组织定位：黏膜组织需将黏膜面朝上，保持自然形态；管状组织（如输卵管）沿长轴纵切包埋；淋巴结需切面与被膜垂直（增加皮质显示面积）；手术切缘标本需用墨汁标记边缘（区分正常与病变组织）。

（3）包埋操作：将组织放入包埋盒中央，注入石蜡后轻震包埋机排出气泡，立即置于-20℃冰台（或4℃冷水浴）冷却，3-5分钟后脱模。

关键控制：包埋时组织错位会导致切片无法显示关键结构（如肿瘤边缘）；石蜡温度过高（＞65℃）会破坏组织抗原；冷却过快（直接放