侧流式microRNA生物传感器研制及应用研究.pdfVIP

摘要

MicroRNA（miRNA）作为一类重要的非编码RNA，在疾病诊断和生物学研究中具

有关键作用。本研究针对传统miRNA检测方法耗时长、实验过程复杂等问题，设计构

建了成本低，操作简单的侧流式核酸生物传感器来检测microRNA，不仅大大提高了检

测灵敏度，也克服了实际样本检测困难的问题，具体内容如下：

（1）借助侧流核酸生物传感器（LFNAB）对miR-122进行灵敏且高效的检测。经

系统优化实验条件，在0pM-100pM的miR-122浓度区间内，LFNAB的响应呈现高度

线性关系。其15分钟的检出限低至3.90pM。其次，运用LFNAB对血清和指尖血中的

miR-122开展检测，可检测到4.09pM的加标血清和一定浓度的加标指尖血样本。这一

成功应用充分证实了LFNAB在血清及指尖血液样本中检测miR-122的有效性，彰显出

其在临床及研究环境中评估不同生物样本内miR-122水平的潜在应用价值。

（2）利用侧流式核酸生物传感器成功实现了对第二种microRNA——miR-25的检

测，并进一步开展了两种miRNA的联合检测实验。实验结果表明，在单独检测miR-25

时，传感器展现出良好的特异性。在5pM至1nM的miR-25浓度范围内，LFNAB的

响应呈现高度线性。检测的响应时间仅为10分钟，miR-25的检测限达1.59pM。此外，

在尝试两种miRNA的联检实验时发现，联检过程中两种miRNA之间存在相互干扰现

象，这一情况可能对联合检测的准确性产生影响。

（3）引入EXPAR技术，通过精心设计特殊DNA模板，实现对目标MicroRNA的

指数级扩增，从而有效提升检测灵敏度。经系统优化实验条件，肉眼可检测到的核酸试

纸最低浓度为0.5fM。在0.5fM-50pM的miR-122浓度范围内，LFNAB的响应呈现高

度线性。5分钟的检出限低至98.7aM。该方法具备特异性高、检测浓度低、检测时间短

等优势。并且，能够有效区分健康人血清与肝炎病人血清样本，为疾病的早期诊断提供

了可能性。

本文首次将侧流式核酸生物传感器与EXPAR相结合，仅在60℃的等温条件下反

应15分钟即可直接进行检测aM级别的miR-122，为后续microRNA的检测提供一种更

为简便和灵敏的方法。

关键词：侧流式生物传感器；microRNA检测；EXPAR；特异性

万方数据

Abstract

MicroRNA(miRNA),asanimportantclassofnon-codingRNAs,playsakeyrolein

diseasediagnosisandbiologicalresearch.AimingattheproblemsoftraditionalmiRNA

detectionmethods,suchaslongtimeandcomplexexperimentalprocess,thisstudydesigned

andconstructedaside-flownucleicacidbiosensorwithlowcostandsimpleoperationtodetect

microRNA,whichnotonlygreatlyimprovedthedetectionsensitivity,butalsoovercamethe

difficultiesofactualsampledetection.Thedetailsareasfollows:

(1)Lateralflownucleicacidbiosensor(LFNAB)wasusedforsensitiveandeff