比率型电化学生物传感器的构建及在肿瘤活性物质检测中的应用.pdfVIP

临沂大学硕士学位论文

摘要

癌症的早期筛查与治疗，对生存率的提高有重要影响。精确、定量的检测肿瘤

活性物质可为癌症的早期筛查和术后监测提供重要依据。肿瘤活性物质是肿瘤细胞

产生并释放的某些物质，常以核酸、抗原、酶等形式存在于体液中，是可以反映肿

瘤细胞存在的一类物质。近年来，分子探针、传感平台及信号放大等多种手段的发

展，使得血液中的肿瘤活性物质能快速、灵敏、即时、定量的检测成为了现实。比

率型电化学传感技术相对于传统的电化学传感器，具有信号响应快且稳定、检测灵

敏度高、成本低等优势，具有重要的应用价值。

本工作的具体研究内容为：

1DNADTN

（）基于四面体（）和双信号放大策略，构建了比率型电化学生物

传感器，用于检测miRNA-21。在靶标存在下，形成核酸双链平齐末端，由Exo核

酸外切酶III催化产生单链引物，进一步在电极表面引发了杂交链式反应。最终形成

DNAH2H1

的双链中，一端修饰有亚甲基蓝，一侧有富含鸟嘌呤的单链部分，在

钾离子存在下嵌插氯化血红素作为信号分子形成G-四链体结构，最终得到两个信号

形成比率型电化学传感器。在最佳反应条件下，靶标浓度的对数与电流信号有良好

的线性关系，线性范围为1fM~10nM，检测限低至0.1523fM。

（2）基于AuNPs/TiCMXene纳米复合材料和双酶辅助靶标扩增循环策略，

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构建了比率型电化学生物传感器，实现了对循环肿瘤DNA（ctDNA）的高灵敏度检

测。ctDNA是一种重要的肿瘤标志物，主要分布在血液、体液中，它可以通过细胞

凋亡和坏死从肿瘤细胞的各个部分释放出来。AuNPs/TiCMXene纳米复合材料的

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SH-HP2HP1ctDNAKRASS1

应用使电极表面上修饰得更加稳定。当与靶标、结合

后，在S1的延伸作用下，致使ctDNAKRAS脱落返回循环使用。当靶标ctDNAKRAS

VentexoDNANb.Bbvcl

存在时，在（）聚合酶的聚合和内切酶的剪切作用下得到一

条单链L，而因剪切的另一端结合则会返回被继续循环扩增。当L与S2结合后，再

VentexoDNANb.Bbvcl

经过（）聚合酶的聚合和内切酶的剪切，最终得到扩增产物

W，另一端也将被循环使用。W将电极表面的发夹结构SH-HP2打开，通过HP3（3′

HP45′NaBHAgNO

端修饰有亚甲基蓝）和（端可通过4还原3形成银纳米簇片段）与

之反应，从而形成杂交链式反应通过电化学检测得到了两个信号。在最佳反应条件

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比率型电化学生物传感器的构建及在肿瘤活性物质检测中的应用

下，靶标浓度的对数与电流信号有良好的线性关系，线性范围为0.1fM~1nM，检

测限低至0.036fM。

关键词：比率型电化学传感；肿瘤活性物质；miRNA；ctDNA

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Abstract

Earlyscreening