31项目7转基因产品检测任务2核酸PCR检测.pptxVIP

项目目标知识目标技能目标

知识目标了解检测原理熟悉相关知识

技能目标熟悉检测仪器掌握操作要点

任务2核酸定量PCR检测1.原理核酸序列的PCR扩增、PCR产物检测以及确证的原理见GB/T19495.4—2004《转基因产品检测核酸定性PCR检测方法》。定量一般是相对含量，是指两个所检测目标核酸绝对含量（ng数或拷贝数）的比值（通常采用百分比），例如检测的外源基因序列的绝对含量（ng数或拷贝数）与内源基因序列的绝对含量（ng数或拷贝数）的比值。核酸定量检测可以采用实时定量或PCR产物的终点定量，前者如实时荧光PCR，后者如竞争性PCR。实时荧光PCR定量检测是在PCR反应体系中，除采用特异的引物外，还增加了与模板DNA匹配的、两端有荧光基因标记的探针。PCR每进行一次循环，合成的新链数与释放的荧光基团数呈对应关系，即PCR产物的量与荧光信号的强度呈对应关系。当荧光信号超过所设定的阈值（ThresholdValue）时，荧光信号可被检测出来．此时所经历PCR循环数称为Ct值。Ct值与模板起始拷贝数的对数呈线性关系。在检测未知含量的样品时，以Ct值为纵坐标、以阳性标准物质（含量）或阳性标准分子（拷贝数）的对数为横坐标绘制成标准曲线，只要获得测试样品的Ct值，利用标准曲线计算出该样品中目标核酸的绝对含量。

2.仪器（1）常规分子生物分析仪器。（2）实时荧光PCR仪。（3）化学PC