流动注射化学发光法测定潘生丁.docVIP

【标题】?流动注射化学发光法测定潘生丁 【作者】冯宗琼 【关键词】?化学发光??铁氰化钾—荧光素??双嘧达莫??流动注射分析 【指导老师】何树华 【专业】化学教育 【正文】1. 引言双嘧达莫（Dipyridamole），又名潘生丁（Persantin），是一含氮杂环的嘧啶类合成药物，对冠状血管有较强的扩张作用，可显著增加冠脉流量，增加心肌供氧量，并能抑制血小板聚集，有防止血栓形成的作用，临床上用于治疗和预防心绞痛、心肌梗塞和冠心病[1]。2005版药典测定双嘧达莫的标准方法为溴酸钾滴定法[2]，滴定法灵敏度较低。此外，测定双嘧达莫的方法还有荧光分光光度法[3-6]，例如，颜承农等人提出了在CTMAB、SDS和β-CD水溶液中测定双嘧达莫的荧光光谱分析法。该法灵敏度较高，线性范围为0.064～3.2μmol.L-1，平均回收率为99.6%，但此方法操作繁琐。此外还有高效液相色谱法[7-9]、伏安法[10-11]等。叶媄媄用高效液相色谱法(HPLC)测定了双嘧达莫的含量。该法线性范围9.94～49.7μg.mL-1(r=0.9999)，平均回收率为101.82%，RSD为1.87%(n=5)。但色谱法操作繁琐，且仪器昂贵。化学发光法因其具有灵敏度高，线性范围宽，仪器简单，操作方便，分析成本低，易与流动注射技术联用等优点，近年来被广泛地应用于药物分析。利用流动注射化学发光法测定双嘧达莫文献中也有报道[12-15]。杨敏丽等人利用高锰酸钾-双氧水体系对双嘧达莫进行流动注射化学发光法测定，方法的检出限为0.058mg.L-1，方法的灵敏度较低。何树华等采用鲁米诺-铁氰化钾体系对双嘧达莫进行流动注射化学发光法测定，方法检出限为0.057μg.L-1(IUPAC)?，方法的灵敏度高，但干扰严重。本文研究发现，在碱性条件下，铁氰化钾能直接氧化双嘧达莫产生微弱发光，而荧光素作为增敏剂，能大大增强该发光强度，且发光强度与双嘧达莫的浓度在一定的范围内呈良好的线性关系。基于此，并结合流动注射技术，建立了一种快速，灵敏，简单的测定双嘧达莫的化学发光新方法。本方法的检测限为0.0021mg.L-1（3σ），线性范围为0.01~0.08mg.L-1??和0.08~0.8mg.L-1??。对0.1mg.L-1??双嘧达莫平行测定11次，其相对标准偏差仅为2.8%。对双嘧达莫片剂的含量测定结果令人满意。2. 实验部分2.1仪器和试剂MCFL-A型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限公司)；Lenovo电脑；HL-2恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）。双嘧达莫标准溶液0.1000g.L-1：准确称取双嘧达莫标准品（中国药品生物制品检定所）10.0mg用二次水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，保存于冰箱中（4℃）；5.0mmol.L-1铁氰化钾储备液；5.0mmol.L-1荧光素储备液；1.0mol. L-1?氢氧化钠。所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。2.2实验方法按图1所示流路安装好仪器，开启蠕动泵，将各管道依次通过稀硝酸、二次蒸馏水清洗干净，插到相应的溶液中，开启化学发光分析仪和IFFM分析系统，仪器测量参数负高压设为-950V，增益设为2，蠕动泵流速调为6.0mL/min的情况下开始测量，待基线稳定后，将流通阀中的双嘧达莫溶液注射到铁氰化钾、荧光素-氢氧化钠的混合液中，记录反应的发光强度，以增加的光强△I定量。?图1?流动注射化学发光测定双嘧达莫示意图Fig.1 Schematic diagram of the flow injection chemiluminescence determination of DipyridamoleP:?蠕动泵（Peristaltic pump） V:?六通阀（valve） F:?流通池（flow-cell） D:检测器（detector）3. 结果与讨论3.1染料的选择及浓度在铁氰化钾浓度为0.08mmol.L-1, NaOH浓度为0.1mmol.L-1，双嘧达莫浓度为0.2mg.L-1条件下，分别考察了罗丹明B、罗丹明6G、二氯荧光素、荧光素对化学发光强度的影响，结果表明：罗丹明B和罗丹明6G对化学发光强度几乎无影响，而二氯荧光素和荧光素都能使化学发光强度增大，但在荧光素中发光强度增大较多，因此选择荧光素用于后继实验。进一步考察了0.01?~0.5 mmol.L-1范围内不同浓度荧光素对发光强度的影响，发现当荧光素浓度低于0.4mmol.L-1?时，发光强度随荧光素浓度增加而增大，当荧光素浓度高于0.4mmol.L-1后发光强度不再增加，基本保持不变，且基线飘逸严重，且信噪比降低(如图2)。因此荧光素的浓度选用0.4mmol.L-1。3. 2