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双分子荧光互补技术研究进展#
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摘要：在过去的十年中，双分子荧光互补（BiFC）已经成为研究蛋白质之间的相互作用的
重要手段，在细胞及多种模式生物中均有应用。 BiFC 的原理是基于两个互补的非荧光片段
被一对相互作用的蛋白质拉近到一起时可重组成完整的蛋白并恢复荧光。在这里，我们回顾
BiFC 技术的发展历史，主要介绍了 BiFC 系统的发展和完善，并从技术角度提出了未来可
能的改进。
关键词：细胞生物学；荧光互补；蛋白质相互作用；荧光蛋白
中图分类号：Q2-33
Research Progress of Bimolecular fluorescence
complementation
DOU Fei, CHANG Xingya
(College of life science,Beijing Normal University, Beijing 100875)
Abstract: In the past decade, the bimolecular fluorescence complementary (BiFC) has become an
important means of study protein interactions。It has been proved very useful in cultured cells and
a variety of model organisms. The BiFC assay is based on reconstitution of an intact fluorescent
protein when two complementary non-fluorescent fragments are brought together by a pair of
interact?ing proteins. Here, we look back at the history of the development of the BiFC
technology, reviewed on the development of the BiFC system, and possible improvements in the
future from a technical point of view.
Keywords: cell biology; fluorescence complementation; protein-protein interaction; fluorescence
protein
0 引言
随着人类基因组计划（human genome project ,HGP）的提前完成，以及其他一些物种如：
线虫（Caenorhabditis elegans）、果蝇（Drosophila melanogaster）、家鼠（Mus musculus）、
拟南芥（Arabidopsis thaliana）、玉米（Zea mays）水稻（Oryza sativa）等基因组全序列的
测通，核酸序列的合成、测序、基因序列的体外重组变得越来越高效、常规，现代生物学已
经进入了后基因组时代（post-genomic era）。后基因组时代的一个重要代表就是蛋白质组学
(proteomics)—系统研究某种物种全部蛋白结构、功能，以及由它们产生相互作用的关系网
络，为进一步，系统的研究生命活动规律奠定基础。蛋白质组学的研究中要借助大量的现代
生物学技术的发展，这其中很重要的一部分技术就是用于研究蛋白质相互作用的信号网络。
目前用于研究蛋白-蛋白相互作用的技术方法有很多种，总体来说有以下一些方法：
1， 基于亲和作用的方法：
如GST-pull down、immunoprecipitation[1]、biotinylation、TAP(tandem affinity
purification)[2]等。
2， 基于库的方法：
、4]
、bacterial two-hybrid、phage display等。
3， 基于下列分子互补作用的方法：
-1-
、6] 、7] 、8]
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complement）
4， 其它：
[9、10]
[6]
、11、12]
、cross-link[13]、Mass
spectrometry[14]等。
其中 FRET 和 BiFC 都是利用荧光物质的指示作用，在活的细胞中，一定波长的激发光
入射某些荧光物质后，波谱会发生红移，产生波长较长的发射光，利用荧光显微镜可以直接
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捕捉到这种变化，从而直接
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