蓝藻抗病毒蛋白-N 衍生物的基因克隆、中试发酵与纯化.docVIP

  蓝藻抗病毒蛋白-N 衍生物的基因克隆、中 试发酵与纯化# 黄鹂，杨辉，吴崇超，陈佳，陈伟，熊盛** 5 10 15 20 25 30 35 40 （暨南大学生物医药基地，广州 510632） 摘要：目的：克隆蓝藻抗病毒蛋白衍生物（SUMO-L10-CVN）,并对其进行原核表达和中试发酵。 方法：通过分子设计及优化，在 CVN 的 N 末端连接 10 个氨基酸的柔性多肽(GGGGS)2。选择 Nde和 BamH I 分别作为上下游引物的酶切位点，将 SUMO-(GGGGS)2-CVN （SUMO-L10-CVN） 的 基 因 克 隆 到 pET-3C 载 体 上 ， 构 建 SUMO-L10-CVN 融 合 表 达 系 统 。 将 构 建 成 功 的 pET-3C-SUMO-L10-CVN 转入大肠杆菌 BL21 中。SUMO-L10-CVN 通过 SUMO 蛋白酶酶切以及进一步 Ni-NTA 亲和层析获得目的蛋白 L10-CVN。结果：SUMO-L10-CVN 在大肠杆菌 BL21 中呈可溶性表 达，以 0.5 mmol/L IPTG 在 20诱导是最佳的诱导表达条件，SUMO-L10-CVN 表达量占菌体 总蛋白的 25％。结论：蓝藻抗病毒蛋白衍生物在大肠杆菌中的成功表达以及发酵条件优化， 为大规模制备 L10-CVN 蛋白奠定了基础。 关键词：蓝藻抗病毒蛋白-N；连接肽；纯化；发酵 中图分类号：Q74 Expression, fermentation and purification of cyanovirin-N derivative Huang Li, Yang Hui, Wu Chongchao, Chen Jia, Chen Wei, Xiong Sheng (Development and Research Center of Jinan University, GuangZhou 510632) Abstract: Objective ： The cDNA of SUMO-L10-CVN gene was cloned and expressed in prokaryotic cells, and the pilot fermentation was completed. Methods:Through molecular design and optimization, a 10-amino acids flexible peptide (GGGGS)2 was linked to the N-terminus of CVN. NdeⅠand BamH I was chosen as the restriction enzyme site of sense primer and antisense primer ,thus the cDNA of SUMO-L10-CVN was cloned into plasmid pET-3c. SUMO-L10-CVN was expressed in a soluble form by SUMO fusion expression system in the cytoplasm of E. coli BL21. The recombinant L10-CVN was purified to homogeneity by Ni-NTA affinity chromatography after SUMO protease cleavage. Results:SUMO-L10-CVN was highly expressed in a soluble form in E coli BL21 under the induction of IPTG (20℃, 0.5 mmol/L).The fusion protein was expressed up to 25 % of the total protein. Conclusion: The fusion protein of SUMO-L10CVN was successfully expressed and purified in E. coli BL21(DE3).This culture method and its optimization of fermentation conditions laid a foundation of large-scale preparation of this recombinant protein. Keywords: cyanovirin-N; linker; purification; fermentation 0 引言 目前全球 HIV 携带者超过 3