马氏珠母贝外套膜外液和珍珠囊液的蛋白质组学研究.pdfVIP

II 马氏珠母贝外套膜外液和珍珠囊液的蛋白质组学研究 摘 要 本文以我国海水珍珠主要生产贝类之一的马氏珠母贝为研究对象，以与贝壳形 成密切相关的外套膜外液 （extrapallial fluid ）和与珍珠形成密切相关的珍珠囊液 （pearl sac fluid ）为研究材料，应用一维凝胶电泳和液相色谱串联质谱技术 （LC-MS/MS ）联用、二维凝胶电泳（2-DE ）和质谱联用、同重同位素相对与绝对 定量技术（iTRAQ ）和液相色谱串联质谱技术联用等方法，首次对外套膜外液和不 同发育时期珍珠囊液蛋白进行了比较分析，结果如下： 一维凝胶电泳和液相色谱串联质谱技术联用，对马氏珠母贝外套膜外液、插核 30 天、90 天珍珠囊液蛋白质全谱进行了测定，分别得到了976、2493 、2239 种蛋白 质，共参与了242 个已知的代谢途径，COG 功能分类显示三样品中分别有6、19、 18 种蛋白质的功能未知，同时鉴定到四种相同的矿化相关蛋白，十种相同的免疫相 关蛋白，每个样品特有的免疫相关蛋白分别有20 、37、32 种。 双向凝胶电泳和质谱技术联用，分离马氏珠母贝外套膜外液和插核 30 天、60 天、90 天珍珠囊液蛋白，得到双向电泳图谱，差异点分析得到多个差异点，筛选出 感兴趣的十五个点进行质谱鉴定，最后成功鉴定出12 个点，鉴定结果主要以肌动蛋 白、热休克蛋白70 家族、精氨酸激酶家族、肌酸激酶、筑丝蛋白以及微管蛋白家族 为主。 同重同位素相对与绝对定量技术（iTRAQ ）和液相色谱串联质谱技术联用，对 马氏珠母贝外套膜外液以及插核30 天、60 天、90 天珍珠囊液蛋白进行了相对和绝 对定量分析，共获得1901 种蛋白，对这些蛋白进行GO、COG 和KEGG 注释分析， 并对差异蛋白进行了GO 和代谢通路富集。以插核30 天珍珠囊液为参照，插核60 天、90 天珍珠囊液和外套膜外液中，分别有128、146、229 种差异蛋白，其中有86 种差异蛋白是相同的，其中与免疫矿化相关的蛋白有：热休克蛋白家族、钙调蛋白 及钙调素类似蛋白、富含半胱氨酸的清道夫受体、钙离子和钙调蛋白依赖性蛋白激 酶等；当以外套膜外液作为参照时，插核30 天、60 天、90 天珍珠囊液中，分别有 229 、201 、180 种差异蛋白，其中有 128 种差异蛋白是相同的，免疫矿化相关蛋白 有：微管蛋白、钙网蛋白、钙结合家族蛋白、热休克蛋白40A、肌浆网Ca2+-ATP 酶、 钙依赖性蛋白激酶、钙离子和钙调蛋白依赖性蛋白激酶、钙调蛋白及钙调素类似蛋 白等。 本研究首次运用三种蛋白质组学研究手段，从不同的方向和角度研究了马氏珠 母贝外套膜外液和珍珠囊不同发育时期珍珠囊液蛋白质的表达情况，大大地丰富了 I 马氏珠母贝蛋白质数据资源，为研究珍珠的形成机制以及插核后免疫排异现象提供 了宝贵的蛋白质信息，进而为我国珍珠产业的健康发展提供理论支持。 关键词：马氏珠母贝，珍珠囊液，外套膜外液，蛋白质全谱，双向凝胶电泳，同重 同位素相对与绝对定量 II Proteome Analysis of Extrapallial Fluid and Pearl Sac Fluid in Pinctada martensii Abstract In this study, we take the pearl oyster Pinctada martensii, which is one of the main oysters to produce seawater pearl in China, as the research object. Three proteomic methods, including SDS, 2-DE, iTRAQ approach coupled with LC-MS/MS, were used to obtain protein inform