海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株50L发酵罐发酵工艺.pdfVIP

海洋多粘类芽孢杆菌 L。一9菌株 50L发酵罐发酵工艺 马桂珍 ，王淑芳 ，暴增海 ，吴少杰 ，夏振强 ，付泓润 1(淮海工学院海洋学院，江苏 连云港 ，222005) 2(江苏省海洋资源开发研究院，江苏 连云港 ，222005) 摘 要 为 了提高海洋细菌 L．·9菌株液体发酵的生物量和抑茵活性，进行 了50L发酵罐的分批发酵和补料发 酵工艺研究。结果表 明：L-9菌株在5OL发酵罐中分批发酵工艺为 ：接种量8％(茵龄 24h、浓度为 1O 个细胞／ mL)、初始搅拌速度 250r／min、通气量为3L／min，发酵时间为 11—12h，生物量达 2．40×10 CFU／mL ；补料分 批发酵工艺为：在分批发酵的条件下，发酵 13h开始流加60g／L葡萄糖溶液 ，使还原糖浓度保持在 0．4g／L左 右，发酵周期30h，生物量达到4．63×10 CFU／mL，比分批发酵提高了78．07％；抑菌时效测定结果表明，发酵液 对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的抑菌作用伴随着生物量的增加不断加强，20h抑菌活性达到高峰，抑 菌带宽度为 l7．75mm，抑菌活性与生物量呈正相关，为生长关联型。 关键词 海洋多粘类芽孢杆菌，生物量，抑菌活性，发酵 多粘类芽孢杆菌 (Paenibacilluspolymyxa)中有很 菌丝生长和孢子萌发具有强烈 的抑制作用-9。该 多菌株可作为重要的生防资源 ，用于多种植物病害的 菌株能产生几丁质酶 、葡聚糖酶、纤维素酶和蛋 白 生物防治 ，该菌对人畜安全 ，无环境污染 ，对植物 酶 和抗菌蛋 白，具有广阔的开发应用前景。本课 非致病性 ，美国环境保护署 (EPA)已将其列为可商业 题对该菌株在50L发酵罐 中的发酵工艺进行研究，为 上应用的微生物种类之一 ，我 国农业部也将其列为 该菌株的进一步开发应用提供理论依据。 免做安全鉴定的一级菌种。徐玲等将筛选到的多粘 1 材料与方法 类芽孢杆菌菌株 HY96．2研制成 了0．1×10 CFU／g 多粘类芽孢杆菌细粒剂 (KDLD)，已登记并在生产上 1．1 材料 应用 ，它对番茄青枯病具有 良好 的防效 。现 已报 1．1．1 供试菌株 道的多粘类芽孢杆菌均分离 自土壤 ，而 L．9菌株是 海洋细菌 L，-9菌株分离 自连云港海域 ，淮海工 分离 自连云港海域对植物病原真菌具有抗菌活性的 学院海洋学院海洋微生物研究室保存。活化后备用 。 多粘类芽孢杆菌 (P．polymyxa)优 良菌株，该菌株形 供试金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusauretts)由本院 态上与已报道的多粘类芽孢杆菌特征一致，但其在海 基础微生物实验室保存 。 水和淡水配制的牛肉膏蛋 白胨培养基上不能生长 ，而 1．1．2 主要 仪 器 在用海水配制的PDA培养基上生长 良好 ，生长特性 MCGS50L自动发酵罐 ，上海百仑生物科技有限 与已报道的多粘类芽孢杆菌菌株具有 明显不同。该 公司；HZQ—F160全温振荡培养箱 ，舟山市定海区海 菌株及其发酵产物对小麦雪腐镰刀病菌 (Fusarium 源仪器厂 ；CR22G高速冷冻离心机，日本 HITACHI公 nivale)、棉 花 枯 萎 病 菌 (Fusarium oxysporum 司；754N分光光度计 ，上海精密科学仪器有限公司； ，sp．vasinfectum)、玉米小斑病菌 (Bipolariamaydis)、 DHG-9240A电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设 玉米圆斑病菌 (Helminthosporiumcarbonum)、小麦赤 备有限公司。 霉病菌 (Fusariumgraminearum)、细链格孢菌 (Alter． 1．1．3 培养基 nariatenuis)、小麦 根腐霉病菌 (Bipolarissorokini- 海洋细菌 L-9菌株活化培养基：马铃薯 200g， ana)、番茄早疫病菌(Ah